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文檔簡介
1、以玉米(Zea mays)幼胚及幼胚誘導(dǎo)的愈傷組織為轉(zhuǎn)化受體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法將2-5A體系的RNaseL基因和2-5A基因、RNaseⅢ基因(野生型和突變型)分別轉(zhuǎn)入玉米自交系Z3和Z31,經(jīng)G418篩選11周后,將抗性愈傷轉(zhuǎn)移到高糖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)分化成苗;利用基因槍轉(zhuǎn)化方法將含有水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streakeddwarfvirus,RBSDV)基因組S1部分片段的真核表達載體pAct-S1和pAHC25(含有
2、bar)共轉(zhuǎn)化玉米,用Bialaphos篩選2個多月后,將抗性愈傷轉(zhuǎn)移到高糖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)分化成苗.獲得轉(zhuǎn)2-5A體系的玉米再生植株共94株,PCR-Southern檢測結(jié)果表明,轉(zhuǎn)化受體Z3獲得雙陽性植株7株,Z31獲得雙陽性植株12株,其中部分植株可育.轉(zhuǎn)化RNaseⅢ的轉(zhuǎn)基因玉米共得到再生植株124株,其中轉(zhuǎn)化野生型的51株,突變型的73株.PCR-Southern檢測的陽性率最高為8.3﹪.其中轉(zhuǎn)化野生型的轉(zhuǎn)基因玉米沒有可育植株,
3、轉(zhuǎn)化突變型的轉(zhuǎn)基因玉米PCR檢測為陽性植株Z3有15株;Z31有24株,部分植株拿到T<,1>代種子.轉(zhuǎn)化pAct-S1的玉米愈傷組織中共獲得再生植株36株,PCR-Southern檢測的陽性率最高為1.54﹪,最低0.42﹪,PCR-Southern檢測結(jié)果表明,有7株為陽性植株,其中4株可育.對其T<,1>代的PCR和Southern檢測結(jié)果表明,外源基因已經(jīng)遺傳至T<,1>代.T<,1>代植株的形態(tài)和農(nóng)藝性狀都沒有出現(xiàn)異常.構(gòu)建了
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