水稻Pi-HIT-1基因表達(dá)的組織特異性和抗逆性分析.pdf

1、我們在1996年利用返回式衛(wèi)星搭載了水稻種子,經(jīng)過7代的選育,獲得了許多穩(wěn)定遺傳的突變品系.本實(shí)驗(yàn)室李常銀采用DD-PCR法從空間誘變的稻瘟病敏感品系972-4及其地面對照品系972ck中找到一個(gè)EST(AF448491),其表達(dá)量上調(diào).生物信息學(xué)分析結(jié)果表明EST(AF448491)全長基因編碼ATP依賴的Clp蛋白酶(AF514859),將其命名為Pi-HIT-1.為了揭示該基因功能以及在水稻抗逆性中的作用機(jī)制,本文對Pi-HIT-

2、1基因的表達(dá)模式進(jìn)行了初步研究.通過生物信息學(xué)和RT-PCR的方法得到水稻Pi-HIT-1基因的全長cDNA,序列分析表明,該基因cDNA序列與預(yù)測結(jié)果基本一致,水稻Pi-HIT-1基因含有5個(gè)外顯子.我們將其3'端半長cDNA連入表達(dá)載體pGEX-4T-2成功構(gòu)建了重組Pi-HIT-1蛋白表達(dá)載體pGEX-Pi-HIT-1.利用該表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)得到GST-Pi-HIT-1融合蛋白.利用親和層析的方法得到

3、純化的融合蛋白GST-Pi-HIT-1.利用該蛋白作為抗原免疫家兔成功制備了抗水稻Pi-HIT-1蛋白多克隆抗體.本文對水稻基因Pi-HIT-1的表達(dá)模式進(jìn)行初步的研究.用Western Blot方法分別在翻譯水平上研究Pi-HIT-1基因的表達(dá)特點(diǎn)包括組織特異性,發(fā)育階段特異性.結(jié)果表明,水稻Pi-HIT-1蛋白在所檢測的根、葉鞘、葉片、穗四種組織中葉鞘和葉片有表達(dá),而在根和穗中沒有檢測到Pi-HIT-1蛋白的表達(dá).同時(shí)發(fā)現(xiàn),在苗期、

4、分蘗期、穗期三個(gè)發(fā)育時(shí)期的葉片中均有Pi-HIT-1蛋白的表達(dá).在研究水稻基因Pi-HIT-1在各種外界環(huán)境壓力下的表達(dá)情況時(shí)發(fā)現(xiàn),水稻Pi-HIT-1蛋白在鹽脅迫下表達(dá)量有所增加,其中在972ck品系中表達(dá)量明顯增加.在兩種品系中Pi-HIT-1蛋白在冷誘導(dǎo)下表達(dá)量均沒有明顯的變化.在稻瘟病誘導(dǎo)下,972-4品系中的Pi-HIT-1蛋白的表達(dá)量明顯地增加,而972ck品系中的表達(dá)量沒有明顯的變化.這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示水稻Pi-HIT-1可