2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  促腎上腺激素皮質釋放激素(Corticotropin releasing factor,CRF)是由下丘腦PVN區(qū)神經(jīng)元合成并分泌的一種應激神經(jīng)肽,其受體包括CRFR1和CRFR2受體。它們在下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA)的功能中起重要作用。
  類胰島素樣生長因子(Insulin-like growth factor,IGF)家族包括兩種

2、配體(IGF-1和IGF-2),相應的受體(IGF-1R和IGF-2R)及六種結合蛋白(IGFBP1~6)。IGF家族在調節(jié)細胞增殖、存活、分化和遷移等方面具有重要的生物學功能。
  我們實驗室主要研究低氧神經(jīng)內分泌網(wǎng)絡調節(jié)機制,CRF及其受體起核心作用,低氧影響肝臟和腦組織的IGF家族表達,本實驗通過整體動物和細胞學實驗,研究低氧下CRF家族和IGFBP家族可能的調節(jié)機制,以及低氧對相關細胞因子的影響;利用敲除IGFBP2小鼠比

3、較CRF家族和IGF家族的組織表達特異性;在AtT-20細胞系上研究了轉錄因子AP-1和NF-κB對CRFR1和IGF-1R受體轉錄的調節(jié)。
  整體水平上,本實驗利用低壓低氧艙模擬7 km低氧環(huán)境,研究大鼠暴露于急性低氧(1、4、8和24 h)和拮抗劑(PDTC,NF-κB拮抗劑和CP154,526,CRFR1拮抗劑)處理后,皮層和垂體CRF,CRFR1和IGF家族基因表達變化,并利用IGFBP2敲除的小鼠和正常野生型C57小鼠

4、比較研究CRF家族和IGF家族在皮層和海馬區(qū)的基因表達變化。
  細胞水平上,利用AtT-20細胞系,給予CRF孵育,研究轉錄因子AP-1和NF-κB對CRFR1和IGF-1R的轉錄調節(jié)。
  方法:
  整體實驗:
  1.大鼠實驗:大鼠暴露于低氧艙模擬的低氧(7 km,1、4、8和24 h),動物分組為:對照組,不同時間的低氧暴露組,拮抗劑組,低氧后收集垂體,皮層和血液白細胞。
  2.小鼠實驗:不同發(fā)

5、育年齡的C57小鼠和IGFBP2 knock-out小鼠,在出生15d和45d分別收集海馬和皮層。
  細胞實驗:
  利用小鼠垂體瘤細胞系(AtT-20),分為對照組,CRF處理組(10nM),拮抗劑組(AP-1或NF-κB inhibitor),拮抗劑+CRF組等。研究CRF通過轉錄因子AP-1和NF-κB調節(jié)CRFR1和IGF-1R轉錄。
  研究采用實時定量PCR和Western-Blot進行檢測。
  

6、結果:
  1.急性低氧呈低氧時間(7km,1,4和8h)相關地增加大鼠垂體CRF mRNA的表達,24 h時降低但仍高于對照水平;急性低氧1,4,8h顯著降低大鼠垂體CRFR1 mRNA的表達,但24 h時回到對照水平。
  2.急性低氧7km8h明顯降低了大鼠垂體和皮層IGF-1 mRNA表達;低氧4,8h增加了垂體和皮層IGF-1R mRNA的表達。
  3.NF-κB拮抗劑和CRFR1拮抗劑部分阻斷了低氧誘導的

7、垂體CRF mRNA表達增加;也阻斷了低氧誘導的垂體CRFR1 mRNA表達的下降和垂體IGF-1R mRNA的增加。但是NF-κB拮抗劑不能阻斷低氧誘導的垂體IGF-1 mRNA表達的下降;CRFR1拮抗劑可以阻斷低氧誘導的垂體IGF-1 mRNA表達的下降。
  4.急性低氧呈低氧時間相關地(7km,1,4和8h)增加大鼠皮層和血液白細胞TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA的表達。
  5.NF-κB拮抗劑阻斷了低

8、氧誘導的血液白細胞TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA表達的增加;CRFR1拮抗劑阻斷了由低氧誘導的IL-1β和IL-6 mRNA表達的增加,但沒有影響TNF-αmRNA表達的增加。
  6.在C57小鼠海馬中,隨年齡發(fā)育, IGFBP2,CRFR1和IGF-1R mRNA表達水平降低,而CRF,SPAR和NR-2B mRNA的表達無明顯變化;在IGFBP2KO的小鼠中,與正常小鼠比較, IGFBP2,CRF,CRFR1,I

9、GF-1R,SPAR和NR-2B的mRNA的表達量都顯著的下降,但不同發(fā)育階段無明顯差異;在C57小鼠皮層中,隨年齡發(fā)育,IGFBP2,CRF和NR-2B mRNA表達水平降低,而SPAR和IGF-1R mRNA表達上升,CRFR1 mRNA表達水平無明顯變化;在IGFBP2KO的小鼠中,與正常小鼠比較, IGFBP2,IGF-1R,SPAR和NR-2B的mRNA的表達量都顯著的下降,CRF的mRNA的表達量隨年齡發(fā)育下降,CRFR1

10、mRNA表達水平無明顯變化。正常小鼠海馬組織的IGFBP2蛋白隨年齡發(fā)育增加。
  7.在AtT-20細胞系中,常氧下CRF顯著降低CRFR1mRNA表達,升高IGF-1R的mRNA表達,AP-1拮抗劑可以阻斷CRF引起的CRFR1基因表達的下降,不影響IGF-1R基因表達;NF-κB拮抗劑不能阻斷CRF引起的CRFR1基因表達的下降,也不能阻斷CRF引起的IGF-1R基因表達的上升。低氧24h,CRF進一步升高了CRFR1和IG

11、F-1R的mRNA的表達,AP-1拮抗劑不能阻斷CRF引起的CRFR1和IGF-1R的基因表達的上升;但NF-κB拮抗劑可以阻斷CRF引起的CRFR1和IGF-1R的基因表達的上升。
  小結:
  急性低氧垂體CRFR1和IGF-1 mRNA表達顯著下降,而CRF和IGF-1R mRNA表達顯著上升。
  急性低氧顯著增加皮層和血液白細胞TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA的表達,CRFR1和NF-κB參與其基

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