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文檔簡介
1、口蹄疫(foot and mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的牛、羊、豬等偶蹄動物的一種急性、烈性傳染病,但其免疫應(yīng)答機制尚不清楚。適應(yīng)性免疫應(yīng)答的啟動需要樹突狀細胞(dendritic cell,DC)的抗原提呈,并且DC還能交叉提呈非復(fù)制性抗原,故被稱為機體最強火的抗原提呈細胞,但目前尚不清楚DC是否提呈FMDV抗原。 FMDV主要經(jīng)消化道、呼吸道和皮膚感染機體,并可在咽部大量繁殖。因此,咽
2、部被認為是抗FMDV感染的重要器官。然而,目前不僅不清楚咽部粘膜組織在對口蹄疫病毒免疫應(yīng)答中的作用,而且對牛咽部DC的分布情況也未見報道。本研究首先用免疫組織化學(xué)法對lO頭乳牛咽部及其引流淋巴結(jié)內(nèi)的DC進行了觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不僅咽部粘膜中有大量DC成群分布,引流淋巴結(jié)皮質(zhì)中的濾泡DC和并指狀DC清晰可辨,而且在淋巴結(jié)髓質(zhì)也有大量S-100+DC分布。為探明咽部DC是否參與FMDV抗原提呈,研究者模擬自然感染途徑給BALB/c小鼠口服接種
3、了FMD滅活疫苗,然后,比較不同時間內(nèi)咽部引流淋巴結(jié)內(nèi)DC的動力學(xué)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),口服FMDV滅活疫苗24h后,小鼠頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DCs數(shù)量就有增多,散在分布于皮質(zhì)區(qū),48h時后小鼠頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DCs數(shù)量明顯增多,并且主要分布于副皮質(zhì)區(qū),在72h后,咽部DCs向頸淺淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)的遷移達到頂峰,至96h,頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DCs的數(shù)量急劇下降,在皮質(zhì)區(qū)和副皮質(zhì)區(qū)內(nèi)呈現(xiàn)散在分布狀,然而,120h后,頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DCs數(shù)量再次增多,且主要分布于皮質(zhì)
4、區(qū)。而PBSSt寸照組未見類似改變。同時,用ELISA法對口服接種FMD滅活疫苗不同時間的小鼠血清IFN-γ水平進行了檢測,結(jié)果顯示,接種疫苗24h后,小鼠血清內(nèi)的IFN-γ,含量就開始升高,但與PBS對照組相比差異不顯著(P>0.05),而48h后,接種疫苗組小鼠血清內(nèi)的IFN-γ含量明顯升高,與PBS對照組相比,差異極顯著(P<0.01)。在接種72h后,接種疫苗組小鼠血清內(nèi)的IFN-γ含量達到最高峰,與PBS對照組相比,差異極顯著
5、(P<0.01)。96h后,IFN-γ含量開始下降,與PBS對照組相比,差異顯著(P‘<0.05),到120h時,與PBS對照組相比差異不顯著(P>0.05)。 以上結(jié)果表明,咽部DC就是FMDV抗原的提呈細胞,為了進一步研究DC提呈滅活FMDV抗原的分子機制,研究者首先制備了BALB/c小鼠的單核細胞源DC,并分別用免疫組織化學(xué)法和流式細胞術(shù)鑒定了DC。將FMD滅活疫苗荷載于DC,并進行細胞培養(yǎng),然后在不同時間點用Wester
6、n blotting法做檢測DC內(nèi)的泛素化蛋白。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在荷載滅活FMD疫苗0.5h后,DC內(nèi)就出現(xiàn)了泛素化FMDV蛋白,分子量大約為75kD,3h后,泛素化蛋白含量稍有增加,但從不同時間點來看,泛素化蛋白含量變化趨勢不明顯。本試驗首次發(fā)現(xiàn),將FMD滅活疫苗荷載于DC后,F(xiàn)MDV泛素化蛋白主要被FK2抗體標記,而FK1抗體標記的較少。這表明,滅活FMDV疫苗抗原在DC內(nèi)既可在蛋白酶體的作用下降解出CD8+T細胞表位,又可在溶酶體內(nèi)水解
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