鵝細小病毒非結構蛋白NS1基因的克隆及原核表達.pdf

1、鵝細小病毒(GooseParvovirus，GPV)是小鵝瘟的直接病原。臨床病理變化以消化道，尤其是小腸部位典型纖維性栓塞為特征。GPV是細小病毒科、細小病毒屬成員，屬自主復制型細小病毒。病毒基因組為單股、線性DNA，核苷酸序列長約5.1kb，含有兩個開放閱讀框架(ORF)，參與調節(jié)病毒生命周期的各個環(huán)節(jié)。　　檢索GenBank所發(fā)表的GPVB株全基因序列，借助PrimerPremier5.0和0ligo6.44軟件設計一對引物，采用

2、PCR技術擴增GPVYZ株非結構蛋白NSl基因，并與PMD18-T載體連接后測序。利用軟件DNAssist2.2對測序結果進行分析，結果表明：GPVYZ株非結構蛋白NSl基因核苷酸全長1881bp，編碼627個氨基酸殘基。與GPVB株的NSl基因相比，核苷酸數(shù)目相同，有36個堿基、13個氨基酸的差異。二者核苷酸序列同源性為98.09％，推導氨基酸序列同源性為97.93％?！　Sl基因插入到原核表達質粒PQE-30Xa的BamHⅠ、

3、SalⅠ多克隆位點之間，將重組原核表達質粒PQE-30Xa-NSl轉化到大腸桿菌M15感受態(tài)細胞中，獲得表達NSl基因的陽性重組子，在含Amp的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)IPTG誘導表達，用SDS-PAGE分析表達產(chǎn)物。結果表明：NSl基因在原核表達細菌大腸桿菌M15中獲得了高效表達，表達產(chǎn)物為約73ku的融合蛋白，表達量達菌體總蛋白的26.5％?！　玫鞍踪|分析軟件ANTHEPROT5.0對得到的GPVYZ株的NSl蛋白進行蛋白序列