胎肝Sca-1~+細胞的橫向分化和應用的實驗研究.pdf

1、　　目的 探討胎肝Sca-1+細胞橫向分化的能力、特點和在腎損傷修復中的作用。方法取14.5天C57BL/6j小鼠的胎肝,制成單細胞懸液；用快速PCR方法鑒定細胞的性別；收集雄性細胞,用MACS(magnetic cell sorting)技術分離雄性胎肝Sca-1+(Stem Cell Antigen-1)細胞；用同樣方法分離骨髓Sca-1+細胞；將2×104的雄性胎肝Sca-1+細胞移植給受致死量γ照射的同系成年雌性小鼠；2~6月后

2、取受體小鼠的腎、肝、肺、胃和小腸組織,制作3-5μm石蠟切片；用原位雜交技術追蹤Y染色體來確定細胞的來源,同時用特異性組織化學技術顯示組織特征。為了研究胎肝Sca-1+細胞修復能力,用甘油誘導小鼠急性腎功能衰竭(acute renal failure.ARF)的模型；3h后,腹膜下注射10μg/kg的G-CSF連續(xù)5天,監(jiān)測血清肌酐和尿素氮水平以及腎組織病理形態(tài)。為了消除內(nèi)源雌性干細胞的作用,用致死量射線清除小鼠體內(nèi)造血干細胞,移植雄性

3、胎肝Sca-1+細胞,8周后雌性小鼠骨髓變?yōu)樾坌怨撬?；用甘油誘導小鼠急性腎功能衰竭,72h后再次輸入2×104雄性胎肝Sca-1+細胞,8周后制取受體腎組織切片。用原位雜交技術追蹤Y染色體來確定細胞的來源,并計算橫向分化的頻率。最后,比較了胎肝和骨髓的Sca-1+細胞向。腎組織細胞分化的頻率。
　　結果 在移植雄性胎肝Sca-1+細胞的雌性小鼠的腎、肝、肺、胃和小腸組織切片中出現(xiàn)雄性細胞,各組織雄性細胞的百分數(shù)分別為(4.5±0.

4、5)%、(0.9±0.1)%、(1.9±0.6)%、(6.1±0.5)%和(7.61±2.3)%,呈現(xiàn)小腸>胃>腎>肺>肝的特征；腎組織切片中的雄性細胞分別為RCA+、CYP1A2+、Vimentin+、CD45-和F4/80-；急性腎損傷使雌性受體小鼠腎組織中的雄性細胞數(shù)增加(8.58±1.34)%,在腎小管周圍出現(xiàn)成對排列的雄性細胞；雄性胎肝Sca-1+細胞輸注使急性腎組織損傷雌性受體小鼠腎臟組織中的雄性細胞增多(18.13±1.9