PVL新生大鼠腦組織P75NTR蛋白R(shí)hoAmRNA表達(dá)及意義.pdf

1、建立新生大鼠PVL模型，了解新生大鼠PVL病理學(xué)改變及對(duì)神經(jīng) 行為學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 方法：1．將新生2日齡SD大鼠98只隨機(jī)分為假手術(shù)組和PVL模型組。 假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動(dòng)脈分離術(shù)而不作結(jié)扎及缺氧處理。PVL模型 組大鼠行右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后吸入含6％氧氣和94％氮?dú)獾难醯旌蠚?體，處理4小時(shí)，建立新生大鼠PVL模型。 2．形態(tài)學(xué)觀察：兩組均在12h、24h、48h、72h、7d、14d、28d 處死動(dòng)物，取

2、腦組織切片。HE染色觀察病理改變，電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)。 3．正常飼養(yǎng)至一月后，在感覺運(yùn)動(dòng)功能及情感行為能力等方面作 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)和生長(zhǎng)發(fā)育評(píng)估。 結(jié)果：1．腦組織HE染色光鏡觀察：假手術(shù)組細(xì)胞排列有序、胞核大、胞 漿少、左右側(cè)腦室對(duì)稱。PVL組缺氧缺血后12h即見紋狀體內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞 水腫；48小時(shí)出現(xiàn)核固縮、胼胝體細(xì)胞稀疏、排列紊亂；72h可見側(cè)腦 室旁白質(zhì)呈篩網(wǎng)狀壞死；14天可見胼胝體變薄、腦室擴(kuò)大、皮質(zhì)下白質(zhì)

3、 空囊形成。 2．腦組織電鏡觀察：假手術(shù)組少突膠質(zhì)細(xì)胞染色質(zhì)分布均勻、核 不規(guī)則、核仁明顯、胞漿少、線粒體形態(tài)規(guī)則。缺氧缺血后12小時(shí)即見 膠質(zhì)細(xì)胞線粒體明顯改變；48小時(shí)可見膠質(zhì)細(xì)胞凋亡； 72小時(shí)可見膠質(zhì)細(xì)胞壞死；28天可見髓鞘稀疏、形成不良。 3．生長(zhǎng)發(fā)育觀察：28天大鼠體重，假手術(shù)組為115.78±6.34g，PVL 模型組為77.33±5.16gt=-12.33 p<0.001兩組體重相比差異有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義。 4．神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)：PVL模型組感覺運(yùn)動(dòng)功能及情感行為能力均較假手術(shù)組明顯降低。 采用單側(cè)結(jié)扎新生2日齡SD大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈后，吸入含6％氧氣和94％氮?dú)獾脱跆幚?小時(shí)，光鏡和電鏡形態(tài)學(xué)發(fā)現(xiàn)48小時(shí)后即有顯著的腦室周圍腦白質(zhì)損害，14天可見顯著的腦室擴(kuò)大、髓鞘減少，符合PVI病理改變。結(jié)合一月齡時(shí)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)，PVL_組大鼠感覺運(yùn)動(dòng)功能、情感行為能力及生長(zhǎng)發(fā)育均較正常對(duì)照組明顯減退，動(dòng)物模型死亡率未超過(guò)3

5、0％，表明本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物PVL_模型制作是成功的。 目的 觀察PVL新生SD大鼠腦組織P75NTR和RhoAmRNA表達(dá)變化，探討兩者關(guān)系及在PVL時(shí)的意義。 方法 在建立新生2日齡SD大鼠PVL模型基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)缺氧缺血后不同時(shí)間點(diǎn)P75NTR蛋白的分布及表達(dá)變化；應(yīng)用熒光定量RT-PCR測(cè)定缺氧缺血后不同時(shí)間點(diǎn)Rho-AmRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果 1．P75NTR的水平測(cè)

6、定：假手術(shù)組大鼠腦室周圍白質(zhì)紋狀體區(qū)、胼胝體區(qū)有P75NTR蛋白的少量表達(dá)；PVL組大鼠紋狀體和胼胝體P75NTR蛋白水平12小時(shí)開始升高，48小時(shí)達(dá)峰值，至72小時(shí)略有下降，仍高于假手術(shù)組水平，與假手術(shù)組比較P均<0.05。之后下降明顯，第7天與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2．Rho-AmRNA的表達(dá)變化：假手術(shù)組大鼠腦中RhoAmRNA表達(dá)各時(shí)段無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PVL組大鼠腦中RhoAmRN

7、A表達(dá)12小時(shí)開始升高，48小時(shí)達(dá)到峰值，與假手術(shù)組比較P均<0.05。72h仍高于假手術(shù)組水平，之后開始下降，第7天下與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論 1.PVL新生大鼠腦組織中P75NTR蛋白水平呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。推測(cè)其升高與介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡和抑制神經(jīng)軸突再生有關(guān)，表達(dá)下降則與缺氧缺血性損傷加重神經(jīng)細(xì)胞壞死相關(guān)。 2．RhoAmRNA的表達(dá)變化趨勢(shì)與P75NTR一致。提示：P75N