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文檔簡介
1、目的:用鹽酸博萊霉素(BLMA<,5>)建立大鼠肺間質(zhì)纖維化的動物模型,通過檢測肺纖維化大鼠模型中Th<,1>/Th<,2>型細(xì)胞因子(IL-4和IFN-γ)、轉(zhuǎn)化生長因子-β<,1>(TGF-β<,1>)、羥脯氨酸(HYP)含量及δδ T細(xì)胞和CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞的變化,探討Th<,1>/Th<,2>免疫平衡及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肺纖維化發(fā)病中的作用。 方法:雄性SD大鼠24只,隨機分為生理鹽水對照組(Control
2、組)6只,模型組(BLM組)18只,模型組經(jīng)氣管灌注博萊霉素(BLMA<,5>5mg/kg)建立肺纖維化模型,對照組給予等量的生理鹽水,正常對照組于第7天全部處死,BLM組于造模后分別于第7、14和28天經(jīng)腹主動脈放血處死(BLM7d、BLM14d、BLM28d組),獲取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF)標(biāo)本,肺組織行HE、VG染色,消化法檢測肺組織勻漿中羥脯氨酸含量(HYP)的變化;免疫組化檢測肺組織中TGF-β<,1>、γδT細(xì)胞
3、及CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞標(biāo)志性蛋白Foxp<,3>的表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測BALF中IL-4、IFN-γ的變化。 結(jié)果:經(jīng)氣管內(nèi)灌注BLM后,病理學(xué)可見第7天肺組織病變以肺泡炎為主,第28天肺內(nèi)形成穩(wěn)定的纖維化;肺組織中HYP含量(μg/mg):隨時間變化分別為BLM7d組(1.071±0.0494),BLMl4d組(1.6303±0.0571),BLM28d組(2.0907±0.0713),較對
4、照組(0.8542±0.035)明顯升高(P<0.001);支氣管肺泡灌洗液IFN-γ含量(pg/ml)在BLM7d組和BLMl4d組分別為(53.982+10.573)、(84.557+7.578),較對照組(117.46±14.292)分泌顯著減少(P<0.001);IL-4含量(pg/ml)在BLM7d組為(11.56+1.21),較對照組(7.213±0.936)明顯升高(P<0.05),BLM28d組中IFN-γ和IL-4含量
5、與對照組比較無明顯差別(P>0.05);肺組織TGF-β<,1>蛋白表達(dá)以BLM7d組最高,為(0.2906±0.0245),BLM14d組(0.2666+0.0214)、BLM28d組(0.2424±0.0175)較BLM7d組蛋白表達(dá)水平有所下降,但較明顯高對照組(0.1722±0.0165)明顯升高(P<0.001);肺組織γδ T細(xì)胞表達(dá)BLM7d組最高,為(0.3099+0.0164),BLMl4d較組BLM7d組表達(dá)降低,B
6、LM28d組與對照組比較無明顯差別(P>0.05);肺組織中Foxp<,3>蛋白表達(dá)在BLM7d組(0.2414±0.0337)開始增加,但較對照組(0.2075±0.0265)無明顯差別(P>0.05),BLMl4d組為(0.3235±0.0330),BLM28d組達(dá)高峰(0.3853±0.025 1)較對照組有差別(P<0.05)。 結(jié)論: (1)在BLM致大鼠肺纖維模型中,在肺泡炎階段存在明顯的“TH2”優(yōu)勢:支氣
7、管肺泡灌洗液中IFN-γ分泌減少,IL-4分泌增加; (2)在BLM誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化早期,γδT細(xì)胞在局部肺組織聚集,可能通過影響Th<,1>/Th<,2>免疫平衡和在疾病早期分泌TGF-β<,1>,影響著肺泡炎及早期纖維化的發(fā)生。 (3)在BLM誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化后期,肺組織局部Foxp<,3>蛋白表達(dá)增加。一方面,肺組織中局部浸潤的CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞可能是機體調(diào)節(jié)過度免疫反應(yīng)的一種機制,抑制過度的
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