蟾毒靈通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯在胰腺癌細(xì)胞中發(fā)揮抗腫瘤作用.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩58頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、胰腺癌是最具侵襲性的惡性腫瘤之一,在世界范圍內(nèi)胰腺癌是癌癥相關(guān)死亡的重要原因。胰腺癌診斷后五年生存率僅約4%,80%~85%的胰腺癌患者在確診時(shí)已經(jīng)無法接受手術(shù)治療或者已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致了其較差的預(yù)后和較低的生存率。對于局部晚期或轉(zhuǎn)移性胰腺癌患者,以吉西他濱為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療是主要的治療方式,然而大多數(shù)胰腺癌患者會對吉西他濱產(chǎn)生耐藥,這是導(dǎo)致胰腺癌化療失敗的重要原因。因此,迫切需要開發(fā)新型藥物來治療胰腺癌。
  既往的基礎(chǔ)研究和臨床

2、試驗(yàn)證明許多由傳統(tǒng)中草藥提取的自然物質(zhì)如喜樹堿、長春花堿是有效抗腫瘤藥物,而這些藥物目前已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于腫瘤的臨床治療,提示利用傳統(tǒng)中藥開發(fā)新型抗腫瘤藥物具有巨大的前景。蟾毒靈是從中藥蟾酥中提取和分離的具有地高辛樣免疫活性的有效成分,既往研究表明蟾毒靈可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、周期阻滯或細(xì)胞自噬而抑制白血病、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞增殖。另有報(bào)道證明蟾毒靈可以增加骨肉瘤和肝癌細(xì)胞對常規(guī)化療藥物的敏感性。但是,

3、蟾毒靈對胰腺癌細(xì)胞的作用尤其是其作用機(jī)制尚未完全闡明,而目前亦缺乏關(guān)于蟾毒靈對胰腺癌化療敏感性影響的研究。
  為了進(jìn)一步闡明蟾毒靈對胰腺癌細(xì)胞的作用及可能的分子機(jī)制,并明確蟾毒靈對吉西他濱抗胰腺癌作用的影響,本論文進(jìn)行了以下四部分研究工作。
  第一部分蟾毒靈對胰腺癌PANC-1和CFPAC-1細(xì)胞增殖的影響
  為了明確蟾毒靈對胰腺癌細(xì)胞增殖是否有抑制作用,我們選用PANC-1和CFPAC-1這兩株胰腺癌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)

4、模型,以不同濃度的蟾毒靈(50nM,100nM,200nM,500nM,1000nM,2000nM)分別作用于這兩株細(xì)胞24h、48h和72h,設(shè)含0.1%DMSO細(xì)胞組為對照組,隨后以CCK-8法檢測細(xì)胞活性的改變。CCK-8結(jié)果顯示,蟾毒靈可以明顯抑制PANC-1及CFPAC-1細(xì)胞增殖,且這種抑制作用呈時(shí)間、濃度依賴性,即隨著作用時(shí)間的延長和藥物濃度的增加,細(xì)胞的增殖抑制率提高,細(xì)胞活性下降。
  第二部分蟾毒靈對胰腺癌細(xì)胞

5、凋亡的影響及可能的分子機(jī)制
  誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是很多抗腫瘤藥物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的重要機(jī)制。我們知道,凋亡過程受到凋亡促進(jìn)分子及凋亡抑制分子的共同調(diào)控,其中研究較多的凋亡抑制分子為Bcl-2,而凋亡促進(jìn)分子為P53,其他與凋亡調(diào)控相關(guān)的分子有Bax、Bcr-abl及PML-RARα等。近年來,越來越多的報(bào)道證明熱休克蛋白可以通過調(diào)控凋亡信號通路中的關(guān)鍵分子發(fā)揮抗凋亡作用。Hsp27是小分子熱休克蛋白家族中的一員,它可以在不同的水平影響

6、內(nèi)源性和外源性凋亡通路抑制細(xì)胞的凋亡促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此,研究以Hsp27為靶點(diǎn)的藥物對腫瘤的治療具有重要意義。
  如前所述,蟾毒靈可以在多種腫瘤細(xì)胞中通過調(diào)控不同的分子通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,而最近的一項(xiàng)研究表明蟾毒靈可以通過靶向抑制Hsp27在骨肉瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡。我們感興趣的是蟾毒靈對胰腺癌細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。因此,在該部分,我們選用PANC-1和CFPAC-1兩株胰腺癌細(xì)胞為模型,以不同濃度的蟾毒

7、靈(0nM,50nM,100nM,200nM)作用于胰腺癌細(xì)胞48h,以適當(dāng)方法收集細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率的改變;利用western blotting技術(shù)檢測PANC-1和CFPAC-1細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白及其上游調(diào)控分子表達(dá)水平的改變。
  流式檢測結(jié)果顯示,隨著藥物濃度的增加,PANC-1和CFPAC-1細(xì)胞的凋亡比率增加,即蟾毒靈可以誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。Western blotting結(jié)果

8、表明,經(jīng)蟾毒靈處理后,Hsp27及其下游分子p-Akt在胰腺癌細(xì)胞中下調(diào)。同時(shí),該研究證明,經(jīng)藥物處理后,pro-caspase-3和pro-caspase-9被激活,而Bax表達(dá)水平升高,Bcl-2表達(dá)下降,即Bax/Bcl-2的比值增高。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們推測蟾毒靈可能通過抑制Hsp27,進(jìn)而調(diào)控其下游關(guān)鍵的凋亡相關(guān)蛋白最終引起細(xì)胞發(fā)生凋亡。
  第三部分蟾毒靈對胰腺癌細(xì)胞周期分布及周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
  抗腫瘤

9、藥物可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯而抑制細(xì)胞增殖,如放線菌素D、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、依托泊苷及長春新堿等。已有相關(guān)報(bào)道證明蟾毒靈可在肝癌、膀胱癌、子宮內(nèi)膜癌等腫瘤細(xì)胞中引起細(xì)胞周期阻滯抑制細(xì)胞增殖活性。那么蟾毒靈是否可以在胰腺癌細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯?為了闡明這一問題,我們利用PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測了不同濃度的蟾毒靈(0~200nM)處理胰腺癌細(xì)胞48h后,PANC-1和CFPAC-1細(xì)胞周期分布情況,發(fā)現(xiàn)胰腺癌細(xì)胞被阻滯在G2/M期;Wes

10、tern blotting技術(shù)檢測了周期相關(guān)蛋白表達(dá),結(jié)果顯示CyclinB1、CDK1表達(dá)水平下降,而p21蛋白表達(dá)水平升高。
  既往的研究表明,CyclinB1、CDK1是G2/M周期檢測點(diǎn)的關(guān)鍵調(diào)控蛋白,而p21是CyclinB1-CDK1復(fù)合物的抑制分子。在本研究中,western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明蟾毒靈可以上調(diào)p21的表達(dá)及抑制CyclinB1、CDK1的表達(dá)。因此,我們認(rèn)為蟾毒靈可能通過上調(diào)p21的水平及

11、抑制CyclinB1、CDK1的表達(dá)和活性使得胰腺癌細(xì)胞發(fā)生周期阻滯。但是,蟾毒靈誘導(dǎo)胰腺癌發(fā)生周期阻滯的具體分子機(jī)制有待于更多的研究進(jìn)行闡明。
  第四部分蟾毒靈在胰腺癌細(xì)胞中對吉西他濱的化療增敏作用
  對于晚期和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移胰腺癌來說,以吉西他濱為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療是主要的治療方式,然而胰腺癌細(xì)胞對吉西他濱耐藥性的產(chǎn)生往往是治療失敗的主要原因之一。已有研究表明,蟾毒靈可以增加肝癌細(xì)胞和骨肉瘤細(xì)胞的化療敏感性,但是在胰腺癌中,蟾

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論