IL-6在胰腺癌細(xì)胞的表達(dá)及其對胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生VEGF-C的調(diào)節(jié).pdf

1、目的:胰腺癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,約占全身惡性腫瘤的1％-4％。近年來,其發(fā)病率呈上升趨勢。因其發(fā)病隱匿,早期診斷困難,發(fā)現(xiàn)時多為中晚期,手術(shù)切除率低,僅10％-20％,預(yù)后差,1年生存率低于17％,5年生存率僅為3％左右,是消化系統(tǒng)惡性腫瘤中預(yù)后最差的一種。其因為之一是胰腺癌細(xì)胞具有強(qiáng)大的侵襲和轉(zhuǎn)移能力,而癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移與血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族

2、密切相關(guān)。其中血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)不僅在人體許多正常組織中存在,在多種腫瘤細(xì)胞內(nèi)也有表達(dá),在腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移方面擔(dān)負(fù)著重要的作用。白細(xì)胞介素6(Intedeukin-6)是人體中常見的炎癥介質(zhì),具有非常復(fù)雜的生物學(xué)功能,可以通過影響細(xì)胞的粘附力、活動力、血栓形成、腫瘤特異性抗原的表達(dá)及腫瘤細(xì)胞的增殖而影響腫瘤的進(jìn)展,其生物學(xué)特性與VEGF家族的表達(dá)息息相關(guān)。本實驗采用細(xì)胞培養(yǎng)與Northenblot法分析IL-6及其受體、

3、VEGF-C mRNA在胰腺癌細(xì)胞的表達(dá)及IL-6對胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生VEGF-C mRNA的調(diào)節(jié),探討其對胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,進(jìn)一步明確胰腺癌侵襲及轉(zhuǎn)移的機(jī)制,為探討胰腺癌新的治療途徑提供實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:1、細(xì)胞培養(yǎng):人胰腺癌細(xì)胞株Capan-1和5H在37℃、5％CO2的飽和濕度的無菌培養(yǎng)箱、RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)(含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素)。人胰腺癌細(xì)胞株Colo-3

4、57在37℃、5％CO2的飽和濕度的無菌培養(yǎng)箱、DME培養(yǎng)基中培養(yǎng)(含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素)。細(xì)胞株復(fù)蘇、傳代、細(xì)胞呈穩(wěn)定對數(shù)生長后,細(xì)胞單層達(dá)80％匯合時,收取細(xì)胞以Trizol一步法提取總RNA,用Northen blot技術(shù)測定胰腺癌細(xì)胞IL-6及其受體和VEGF-CmRNA的表達(dá),以β—actin作為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn),分析胰腺癌細(xì)胞株IL-6及其受體和VEGF-C tuRNA的表達(dá)。
　　

5、 2、細(xì)胞刺激:以上述方法常規(guī)培養(yǎng)Capan-1和Colo-357細(xì)胞,細(xì)胞株復(fù)蘇、傳代、細(xì)胞呈穩(wěn)定對數(shù)生長后,將培養(yǎng)液更換為含0.1％胎牛血清的相應(yīng)的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12小時,以消除血清對細(xì)胞增殖的影響。將各細(xì)胞培養(yǎng)基更換為含有50μg/L濃度梯度的IL-6的0.1％胎牛血清的培養(yǎng)基作為實驗組,然后分別培養(yǎng)3、6小時,以培養(yǎng)0小時作為對照組,按時收取細(xì)胞后以Trizol一步法提取刺激前后總RNA,用Northen blot技術(shù)測定刺激

6、前后胰腺癌細(xì)胞VEGF-C mRNA的表達(dá),以β-actin作為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn),分析刺激前后胰腺癌細(xì)胞株VEGF-C mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:1 IL-6及其受體和VEGF-C mRNA在胰腺癌細(xì)胞的表達(dá):IL-6及其受體和VEGF-C mRNA在胰腺癌細(xì)胞Capan-1、Colo-357和5H中有不同程度的表達(dá)。
　　 2 IL-6對胰腺癌細(xì)胞Capan-1和Colo-357表達(dá)VEGF-C mRNA的影響:

7、　　 1)IL-6對胰腺癌細(xì)胞Capan-1表達(dá)VEGF-C mRNA的影響:以50μg/L濃度的IL-6刺激Capan-1細(xì)胞3h、6h后,與對照組相比,2.4kb片段的VEGF-C mRNA的條帶強(qiáng)度有不同程度的減弱,IL-6對胰腺癌細(xì)胞Capan-1 VEGF—C mRNA的表達(dá)有抑制作用,并隨作用時間呈正相關(guān)。
　　 2)IL-6對胰腺癌細(xì)胞Colo-357表達(dá)VEGF-C mRNA的影響:以50μg/L濃度的IL-6

8、刺激Colo-357細(xì)胞3h、6h后,與對照組相比,2.4kb片段的VEGF-C mRNA的條帶強(qiáng)度有不同程度的增強(qiáng),IL-6對胰腺癌細(xì)胞Colo-357 VEGF-C mRNA的表達(dá)有促進(jìn)作用,但與作用時間無明顯關(guān)系。
　　 結(jié)論:1 IL-6及其受體和VEGF-C mRNA在胰腺癌細(xì)胞Capan-1、Colo-357、5H中有不同程度的表達(dá)；
　　 2 IL-6抑制胰腺癌細(xì)胞Capan-1 VEGF-C mRNA的表