牛朊蛋白3個(gè)單氨基酸變異體的原核表達(dá)及其包涵體蛋白的變性與復(fù)性.pdf_第1頁(yè)
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1、目的本研究擬以牛朊蛋白正?；蚝推浜瑔蝹€(gè)氨基酸突變的3個(gè)變異體基因克隆為實(shí)驗(yàn)材料,構(gòu)建牛朊蛋白基因重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-BoPrP(93~241)、pGEX-BoPrP(93~241)(S154N)、pGEX-BoPrP(93~241)(A129V)和pGEX-BoPrP(93~241)(Q234R)及其各原核表達(dá)重組菌,以獲得4種有活性的牛重組朊蛋白,進(jìn)而為牛朊蛋白基因突變與其蛋白結(jié)構(gòu)和性質(zhì)變化關(guān)系的研究提供實(shí)驗(yàn)材料.結(jié)果成功構(gòu)建了重

2、組菌E.coli GST-BoPrP(93~241)、GST-BoPrP(93~241)(S154N)、GST-BoPrP(93~241)(A129V)和GST-BoPrP(93~241)(Q234R),分別可表達(dá)預(yù)期分子質(zhì)量約為42.4 ku的與單抗4C11發(fā)生反應(yīng)的融合蛋白;在37℃以1 mmol/LIPTG誘導(dǎo)表達(dá)6 h的優(yōu)化條件下,各重組菌可產(chǎn)生表達(dá)量占細(xì)菌總蛋白量30﹪~45﹪的目的蛋白;各重組菌誘導(dǎo)表達(dá)后所產(chǎn)生的目的蛋白以包

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