牛分枝桿菌外膜相關蛋白的原核表達與反應原性鑒定.pdf

1、牛結核病是由細胞內(nèi)寄生的革蘭氏陽性牛分枝枝桿菌引起的一種人畜共患病,給人類健康和畜牧業(yè)的發(fā)展帶來了巨大危害。世界衛(wèi)生組織(WHO)指出:“在存在牛結核的國家中,人類始終受到它的威脅,除非著手消滅牛結核病,否則人類結核病的控制是不會成功的。“目前,一些較發(fā)達的國家和地區(qū),如美國、澳大利亞、北歐等已基本消滅了牛結核病,但由于人結核病和野生動物結核病的存在,致使這些國家仍對牛結核處于不斷的檢疫和高度的警惕之中。在廣大的發(fā)展中國家,該病仍嚴重的

2、流行。但近年來,隨著分子生物學和免疫學的發(fā)展和應用,牛分枝桿菌基因組序列的不斷增加及許多重要基因功能的闡明,對該菌致病機理和免疫機制等認識不斷加深,這為該病的防治打下了良好的基礎。近年來,牛結核病診斷方法逐漸得到改善,發(fā)現(xiàn)了很多特異性抗原蛋白編碼基因。傳統(tǒng)細菌學檢測方法、免疫學方法和分子生物學方法相結合,加速了牛結核病診斷技術和產(chǎn)品的研究和開發(fā)。
　　 牛分枝桿菌外膜蛋白位于細菌細胞膜的最外層,因其具有免疫原性和免疫保護作用一直

3、備受注目。本研究通過對牛分枝桿菌基因組序列分析,選取其外膜蛋白或胞壁蛋白編碼基因20個,通過信號肽和跨膜結構分析,選定20種膜外蛋白基因,利用Primer5.0分析軟件設計相應引物。將牛結核分枝桿菌滅活后提取基因組作為模板,通過降落PCR方法擴增目的片段并與原核表達載體PET-32a(+)連接,成功構建了13個牛結核分枝桿菌膜相關蛋白基因重組表達載體;經(jīng)測序鑒定、誘導表達和SDS-PAGE檢測表明,7種膜蛋白重組載體獲得表達。最后,以結