輪狀病毒致乳鼠腸道外感染肝臟Th1-Th2細(xì)胞因子變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:1、建立輪狀病毒腸道內(nèi)外感染的乳鼠模型，檢測輪狀病毒(Rotavirus,RV)腸道內(nèi)、外感染乳鼠肝臟中 Th1類細(xì)胞因子(IFN-γ)和 Th2類細(xì)胞因子（IL-10）水平，比較肝臟中Th1/Th2細(xì)胞因子在輪狀病毒腸道內(nèi)外感染，以及不同時(shí)間點(diǎn)變化的差異性,進(jìn)一步探討Th1/Th2細(xì)胞因子免疫自穩(wěn)失衡與輪狀病毒腸道外感染發(fā)病的關(guān)系，推測以恢復(fù) Th1/Th2細(xì)胞因子平衡為目標(biāo)的治療策略可能是治療輪狀病毒腸炎的一種新方法。2、觀察

2、乳鼠感染 RV后的臨床表現(xiàn)以及不同時(shí)間點(diǎn)肝臟組織的病理變化，探討其損傷的病理特點(diǎn)。
　　方法:猴輪狀病毒 SA-11株在 MA-104(非洲綠猴腎傳代細(xì)胞)上傳代培養(yǎng)，擴(kuò)增，組織細(xì)胞半數(shù)感染（TCID50）法滴定病毒滴度，分裝，-80℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)動(dòng)物選用3-5日齡的清潔級BALB/C乳鼠，將54只乳鼠隨機(jī)分為三組，每組18只，即實(shí)驗(yàn)組，包括腸道外組：通過腹腔注入0.10ml(1×105)TCID50感染性滴度計(jì)量的SA-11株

3、病毒；腸道內(nèi)組:通過口腔灌入0.10ml(1×105)TCID50感染性滴度計(jì)量的SA-11株病毒;對照組無特殊處理。感染病毒后,各組動(dòng)物進(jìn)行隔離飼養(yǎng)。接種后觀察乳鼠的活動(dòng)情況、飲食情況、體型、毛色、大便變化情況等等，收集大便經(jīng)膠體金法檢測其中RV抗原。分別在接種后的第3天、第5天、第8天處死乳鼠，留取肝臟，免疫組化方法檢測 IFN-γ和 IL-10水平并蘇木精—伊紅（HE）染色光鏡下觀察肝臟的形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果:1、MA-1

4、04細(xì)胞感染輪狀病毒 SA-11株后狀態(tài)良好，感染后24小時(shí)細(xì)胞病變表現(xiàn)明顯，90％以上出現(xiàn)明顯拉網(wǎng)、圓縮、脫落，組織細(xì)胞半數(shù)感染量法滴定所收集的病毒液，滴度TCID50為10-4。2、兩組乳鼠感染RV后表現(xiàn)為食欲不佳，生長發(fā)育較對照組緩慢，活動(dòng)少反應(yīng)差，精神萎靡,皮膚皺褶，腹瀉乳鼠糞便RV抗體定性檢測均為陽性3、正常對照組兩種細(xì)胞因子表達(dá)量較少，腸道內(nèi)組 IFN-γ水平在接種 RV后的第三天明顯增多，第三天至第八天緩慢減少；IL-10

5、水平較正常組增高但整個(gè)過程未見明顯變化。腸道外組IFN-γ水平與腸道內(nèi)組比較無差異；IL-10水平在感染第三天也明顯增多，第三天至第八天有所減少但仍存在且高于正常組。4、電鏡下肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，線粒體腫脹、空泡變性明顯，大量脂肪變，細(xì)胞點(diǎn)狀壞死且大量炎細(xì)胞浸潤，可見核分裂象。
　　結(jié)論:1.BALB/C乳鼠腸道內(nèi)外感染RV動(dòng)物模型建立成功。乳鼠腸道外感染早期肝臟內(nèi)細(xì)胞因子呈現(xiàn)Th1-Th2混合反應(yīng)，后期以Th-2的應(yīng)答占優(yōu)勢，而腸道