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1、目的:1、建立輪狀病毒腸道內(nèi)外感染的乳鼠模型,檢測(cè)輪狀病毒(Rotavirus,RV)腸道內(nèi)、外感染乳鼠肝臟中 Th1類細(xì)胞因子(IFN-γ)和 Th2類細(xì)胞因子(IL-10)水平,比較肝臟中Th1/Th2細(xì)胞因子在輪狀病毒腸道內(nèi)外感染,以及不同時(shí)間點(diǎn)變化的差異性,進(jìn)一步探討Th1/Th2細(xì)胞因子免疫自穩(wěn)失衡與輪狀病毒腸道外感染發(fā)病的關(guān)系,推測(cè)以恢復(fù) Th1/Th2細(xì)胞因子平衡為目標(biāo)的治療策略可能是治療輪狀病毒腸炎的一種新方法。2、觀察
2、乳鼠感染 RV后的臨床表現(xiàn)以及不同時(shí)間點(diǎn)肝臟組織的病理變化,探討其損傷的病理特點(diǎn)。
方法:猴輪狀病毒 SA-11株在 MA-104(非洲綠猴腎傳代細(xì)胞)上傳代培養(yǎng),擴(kuò)增,組織細(xì)胞半數(shù)感染(TCID50)法滴定病毒滴度,分裝,-80℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)動(dòng)物選用3-5日齡的清潔級(jí)BALB/C乳鼠,將54只乳鼠隨機(jī)分為三組,每組18只,即實(shí)驗(yàn)組,包括腸道外組:通過(guò)腹腔注入0.10ml(1×105)TCID50感染性滴度計(jì)量的SA-11株
3、病毒;腸道內(nèi)組:通過(guò)口腔灌入0.10ml(1×105)TCID50感染性滴度計(jì)量的SA-11株病毒;對(duì)照組無(wú)特殊處理。感染病毒后,各組動(dòng)物進(jìn)行隔離飼養(yǎng)。接種后觀察乳鼠的活動(dòng)情況、飲食情況、體型、毛色、大便變化情況等等,收集大便經(jīng)膠體金法檢測(cè)其中RV抗原。分別在接種后的第3天、第5天、第8天處死乳鼠,留取肝臟,免疫組化方法檢測(cè) IFN-γ和 IL-10水平并蘇木精—伊紅(HE)染色光鏡下觀察肝臟的形態(tài)學(xué)改變。
結(jié)果:1、MA-1
4、04細(xì)胞感染輪狀病毒 SA-11株后狀態(tài)良好,感染后24小時(shí)細(xì)胞病變表現(xiàn)明顯,90%以上出現(xiàn)明顯拉網(wǎng)、圓縮、脫落,組織細(xì)胞半數(shù)感染量法滴定所收集的病毒液,滴度TCID50為10-4。2、兩組乳鼠感染RV后表現(xiàn)為食欲不佳,生長(zhǎng)發(fā)育較對(duì)照組緩慢,活動(dòng)少反應(yīng)差,精神萎靡,皮膚皺褶,腹瀉乳鼠糞便RV抗體定性檢測(cè)均為陽(yáng)性3、正常對(duì)照組兩種細(xì)胞因子表達(dá)量較少,腸道內(nèi)組 IFN-γ水平在接種 RV后的第三天明顯增多,第三天至第八天緩慢減少;IL-10
5、水平較正常組增高但整個(gè)過(guò)程未見(jiàn)明顯變化。腸道外組IFN-γ水平與腸道內(nèi)組比較無(wú)差異;IL-10水平在感染第三天也明顯增多,第三天至第八天有所減少但仍存在且高于正常組。4、電鏡下肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松,線粒體腫脹、空泡變性明顯,大量脂肪變,細(xì)胞點(diǎn)狀壞死且大量炎細(xì)胞浸潤(rùn),可見(jiàn)核分裂象。
結(jié)論:1.BALB/C乳鼠腸道內(nèi)外感染RV動(dòng)物模型建立成功。乳鼠腸道外感染早期肝臟內(nèi)細(xì)胞因子呈現(xiàn)Th1-Th2混合反應(yīng),后期以Th-2的應(yīng)答占優(yōu)勢(shì),而腸道
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