輪狀病毒致乳鼠感染后IFN-γ-IL-17水平及腸道外損傷的研究.pdf

1、目的:建立BALB/c乳鼠腸道感染輪狀病毒(Rotavirus,RV)的動(dòng)物模型，檢測(cè)血Th1細(xì)胞因子(IFN-γ）和Th17細(xì)胞因子（IL-17）的水平，動(dòng)態(tài)比較兩細(xì)胞因子在不同時(shí)間點(diǎn)變化的差異性，進(jìn)一步探討RV感染后機(jī)體的細(xì)胞免疫過(guò)程及相關(guān)細(xì)胞因子的關(guān)系，深入了解RV感染的免疫病理特點(diǎn)，為臨床防治RV感染及腸道外損傷尋找新的辦法。
　　方法:以恒河猴胚腎細(xì)胞（MA-104）培養(yǎng)猴RV SA-11株，擴(kuò)增，組織細(xì)胞半數(shù)感染量（T

2、CID50）法測(cè)定病毒滴度，分裝，-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)動(dòng)物選用清潔級(jí)BALB/c乳鼠60只，日齡3-5日，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組，每組30只，即實(shí)驗(yàn)組（RV感染模型組）:胃內(nèi)灌入100ul（1×10-4）TCD50感染性滴度的SA-11株RV；空白對(duì)照組：胃內(nèi)灌入100ul NS。病毒接種后，各組動(dòng)物隔離飼養(yǎng)。接種當(dāng)天以第0天計(jì)，接種后每天觀察乳鼠的活動(dòng)情況、有無(wú)皮膚脫水、肛門紅腫、腹部鼓脹、體型、飲食情況及大便變化情況等，收集大

3、便經(jīng)膠體金法檢測(cè)RV抗原。分別在接種后的第3天和第8天（每組各15只），活體摘除眼球取血各約0.5ml，血標(biāo)本4000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘留取血清（每個(gè)標(biāo)本血清約50-100ul），經(jīng)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-17水平。處死乳鼠，留取肝臟、心臟等放置福爾馬林內(nèi)固定，蘇木精－伊紅（HE）染色光鏡下觀察形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果:1、RV SA-11株在MA-104細(xì)胞內(nèi)增殖良好，感染后24h即可出現(xiàn)病變，72h病變可達(dá)

4、到(+++～++++)，組織細(xì)胞半數(shù)感染量法滴定所收集的病毒液，滴度TCID50為10-4。2、實(shí)驗(yàn)組乳鼠表現(xiàn)為食欲不振，活動(dòng)減少，皮膚干燥、嗜睡、對(duì)刺激反應(yīng)差、腹脹、腹瀉癥狀（大便軟、稀薄樣便）等，第3～4天達(dá)到頂峰，至第8天精神狀況好轉(zhuǎn)。對(duì)照組乳鼠一直保持正常情形，皮膚彈性可，對(duì)刺激反應(yīng)靈敏，食欲正常，精神活躍，大便正常。3、感染后第3天實(shí)驗(yàn)組IFN-γ水平明顯高于對(duì)照組（P﹤0.01），第8天時(shí)水平與正常對(duì)照組比較未見顯著差異（P

5、﹥0.05）；感染后第3天實(shí)驗(yàn)組IL-17水平與正常對(duì)照組比較未見顯著差異（P﹥0.05），第8天時(shí)水平明顯高于對(duì)照組（P﹤0.05）。4、光鏡下實(shí)驗(yàn)組乳鼠第3天大部分肝細(xì)胞腫脹，中、重度空泡變性，灶狀LC浸潤(rùn)；心肌細(xì)胞濁腫，心肌間質(zhì)水腫，心內(nèi)膜、心肌層LC浸潤(rùn)，第8天時(shí)個(gè)別肝臟細(xì)胞稍腫脹，輕度空泡變性，心肌細(xì)胞大致正常。對(duì)照組肝臟及心臟病理未見明顯改變。
　　結(jié)論:BALB/c乳鼠感染RV動(dòng)物模型建立成功。乳鼠感染RV尤其在早期