小檗堿對氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察小檗堿對氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的損傷是否具有保護(hù)作用，并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：對凍存的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)株CRL1730進(jìn)行復(fù)蘇與傳代，細(xì)胞用含15％新生牛血清的DMEM培養(yǎng)基，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分為5組：對照組、模型組(僅300mg/L ox-LDL處理組)、小檗堿預(yù)處理組(經(jīng)25、50、100μ mol/L小檗堿分別預(yù)處理組)。將細(xì)胞均

2、勻一致接種后待細(xì)胞貼壁良好密度達(dá)75％時開始實(shí)驗(yàn)，對照組和模型組用正常培養(yǎng)基培養(yǎng)4h，小檗堿預(yù)處理組用含不同濃度小檗堿的培養(yǎng)基培養(yǎng)4h，然后除對照組外其余四組均換成300mg/L的ox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)24h。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；MTT法檢測細(xì)胞生存率；收集細(xì)胞培養(yǎng)液用硝酸還原酶法和放射免疫法分別檢測一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素-1(ET-1)含量；收集細(xì)胞用RT-PCR法和western-blot法分別檢測細(xì)胞中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(

3、eNOS)mRNA和eNOS蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：與對照組相比，模型組細(xì)胞明顯皺縮變圓，間隙增大，胞漿內(nèi)見較多顆粒和空泡；細(xì)胞生存率明顯受到抑制(P＜0.01)；NO含量明顯降低(P＜0.01)；ET-1含量明顯增加(P＜0.01)；eNOSmRNA和蛋白的表達(dá)水平均明顯減少(P＜0.01)。
　　 與模型組相比，不同濃度的小檗堿預(yù)處理組，大多數(shù)細(xì)胞呈正常形態(tài)，間隙正常，少數(shù)皺縮變圓；細(xì)胞生存率三組均明顯增加(P

4、＜0.05)；NO含量均增加(P＜0.05)；ET-1含量均降低(P＜0.05)；25μ mol/L和50μ mol/L小檗堿預(yù)處理組eNOSmRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯上調(diào)(P＜0.05)，而100μmol/L小檗堿預(yù)處理組eNOSmRNA和蛋白的表達(dá)水平與模型組比較無差異(P＞0.05)。
　　 不同濃度小檗堿預(yù)處理組之間相比，隨著小檗堿預(yù)處理濃度的增加細(xì)胞生存率逐漸降低(P＜0.05)；NO含量逐漸減少(P＜0.05)；E

5、T-1含量逐漸增加(P＜0.05)；eNOSmRNA和eNOS蛋白的表達(dá)水平逐漸降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：300mg/L的ox-LDL能夠明顯抑制甚至殺死內(nèi)皮細(xì)胞，能夠明顯上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞分泌ET-1水平，下調(diào)NO及eNOSmRNA、eNOS蛋白表達(dá)水平。
　　 一定濃度范圍內(nèi)的小檗堿能夠抑制ox-LDL對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，對內(nèi)皮細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用，這種保護(hù)作用機(jī)制之一可能是小檗堿抑制ox-LDL引起的內(nèi)皮細(xì)胞e