miR-155在氧化低密度脂蛋白介導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬中的作用.pdf

1、目的：
　　探討 miR-155在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）自噬中的作用。
　　方法：
　　1.采用濃度為100μg/mL的ox-LDL對HUVECs作用處理，分別在不同的時刻收集細胞，用電鏡觀察HUVECs內(nèi)的超微改變，同時采用qRT-PCR技術(shù)檢測LC3和p62的mRNA的表達及miR-155的表達，用Western blot技術(shù)測定LC3-II及p62的蛋白水平，初步觀

2、察ox-LDL對HUVECs自噬水平及miR-155水平的改變。2.將HUVECs分為正常對照組，ox-LDL組，ox-LDL+miR-155mimic組，ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+miRNA negative control（NC）組五個試驗組。其中正常對照組不加任何干擾，而 ox-LDL組，ox-LDL+miR-155mimic組，ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+mi

3、RNA NC組則用ox-LDL（100μg/mL）進行誘導(dǎo)刺激。用電鏡觀察各組細胞內(nèi)的自噬體的形狀和數(shù)量，用qRT-PCR方法測定LC3和p62的mRNA的水平，用Western blot技術(shù)檢測LC3-II及p62的蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.我們用100μg/mL的ox-LDL處理HUVECs6小時、12小時后，電鏡結(jié)果顯示細胞內(nèi)出現(xiàn)較多的自噬體及自噬溶酶體，qRT-PCR技術(shù)顯示LC3mRNA表達上調(diào)，而 p6

4、2mRNA表達下調(diào)，western blot結(jié)果顯示 LC3-II/GAPDH的水平上升，而p62/GAPDH的水平下降。由于細胞內(nèi)LC3上調(diào)及p62下調(diào)在6小時的時候最明顯，因此，我們將6小時作為后續(xù)實驗的作用時間點。此外，qRT-PCR結(jié)果顯示ox-LDL處理后的細胞內(nèi) miR-155的表達增加。2.用 miR-155mimic，miR-155inhibior及miR-155 NC對細胞進行轉(zhuǎn)染，并用100μg/mL ox-LDL處