鹽酸噻吩諾啡緩釋微球注射劑的研究.pdf

1、毒品是當(dāng)今世界性公害。臨床戒毒治療周期長(一般采用3-6個(gè)月的連續(xù)給藥方案),只有堅(jiān)持長期用藥,才能達(dá)到戒毒的臨床目的。傳統(tǒng)劑型需要頻繁給藥,而戒毒患者意志薄弱、順應(yīng)性差,往往難以堅(jiān)持到底,造成復(fù)吸率極高。研究開發(fā)被動(dòng)給藥的長效制劑是解決該問題的一個(gè)有效途徑。微球注射劑是緩釋制劑的代表劑型之一,開發(fā)一個(gè)月注射一次的微球注射劑可以顯著延長給藥間隔,提高患者用藥的順應(yīng)性;藥物以注射途徑進(jìn)入體內(nèi)還能避免戒毒患者因誘惑而自行去除藥物導(dǎo)致戒毒的失

2、敗。
　　鹽酸噻吩諾啡(Thienorphine hydrochloride, TNP)是軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所研制的國家一類新藥。該藥為阿片受體部分激動(dòng)劑,抗嗎啡依賴作用強(qiáng),有效劑量小,有可能成為一個(gè)安全有效的防復(fù)吸藥物。目前該藥無制劑上市,其片劑已獲得臨床研究批件,規(guī)格為0.2、0.5mg/片。
　　本課題以PLGA(75/25)分子量15000Da為載體,研制了鹽酸噻吩諾啡緩釋微球注射劑。本論文主要研究內(nèi)容包括鹽

3、酸噻吩諾啡微球的處方和制備工藝研究、體外釋放度試驗(yàn)方法學(xué)研究、體外釋藥機(jī)理研究、初步穩(wěn)定性考察、藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)研究(包括體內(nèi)外相關(guān)性研究)以及微球的生物相容性研究。
　　1 O/W型乳化溶劑揮發(fā)法制備鹽酸噻吩諾啡微球
　　首先采用單因素優(yōu)化法,考察了理論載藥量(A)、PLGA濃度(B)、乳化劑PVA濃度(C)、乳化攪拌速度(D)、油水體積比(E)等影響因素,并采用主成分分析方法對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合分析,結(jié)果顯示理論載藥量(A)

4、、PLGA濃度(B)和乳化劑PVA濃度(C)是影響微球總體質(zhì)量的主要因素。
　　采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)安排實(shí)驗(yàn),效應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化分析,考察了理論載藥量、PLGA濃度、PVA濃度對微球載藥量、包封率、平均粒徑和第1天微球釋藥百分?jǐn)?shù)(F1d)的影響。確定了鹽酸噻吩諾啡微球的處方和優(yōu)化工藝。優(yōu)化后的處方和制備工藝重現(xiàn)性好,制備的微球大小均一,表面光滑圓整,平均粒徑為34.74μm,跨距為1.04,微球的包封率為57.3％,載藥量為4.57％,F1

5、d為12.17％,體外可持續(xù)釋藥21天。為考察優(yōu)化處方和工藝進(jìn)行工業(yè)化大生產(chǎn)的可能性,本研究制備了1.5g量的微球,結(jié)果表明放大制備的微球性能良好,微球的包封率為64.12％,載藥量為5.13％,F1d為14.04％,粒徑為35.60μm,跨距為1.20,體外可持續(xù)釋藥21天。
　　2鹽酸噻吩諾啡微球的質(zhì)量評價(jià)方法學(xué)研究
　　為控制鹽酸噻吩諾啡微球的質(zhì)量,建立了HPLC微球載藥量測定方法、釋放介質(zhì)中鹽酸噻諾啡含量測定方法及微

6、球有關(guān)物質(zhì)檢查方法,方法準(zhǔn)確、靈敏,輔料及降解產(chǎn)物不干擾主藥測定。
　　3鹽酸噻吩諾啡微球體外釋放度試驗(yàn)的方法學(xué)及體外釋藥機(jī)理研究
　　在微球的體外釋藥研究中,由于國內(nèi)外目前尚無統(tǒng)一或公認(rèn)的方法,所以分別采用了不同的釋藥方法進(jìn)行釋藥研究,并對釋藥結(jié)果和釋藥方法進(jìn)行了綜合評價(jià)。由于鹽酸噻吩諾啡在水中不溶或幾乎不溶,因此首先進(jìn)行了釋放介質(zhì)的篩選。結(jié)果表明采用5％乙醇水溶液作為體外釋放介質(zhì)可以滿足“漏槽條件”,且在該介質(zhì)中鹽酸噻吩

7、諾啡能夠保持穩(wěn)定。針對直接釋藥法和透析釋藥法各自存在的弊端,對體外釋放條件進(jìn)行了考察。進(jìn)行直接釋藥法研究時(shí),考察了釋放介質(zhì)的體積對微球體外釋放度的影響;進(jìn)行透析釋藥法研究時(shí),考察了透析袋內(nèi)溶液的濃度對藥物擴(kuò)散速率和滲透系數(shù)的影響,以及透析袋內(nèi)溶液的體積對微球釋藥速度的影響。利用高溫和酸性條件下PLGA的水解速度加快的原理,本文建立了加速釋藥的方法。對長期釋藥試驗(yàn)和加速釋藥試驗(yàn)的釋放度數(shù)據(jù)進(jìn)行點(diǎn)點(diǎn)對應(yīng)的相關(guān)性擬合,結(jié)果顯示鹽酸噻吩諾啡微球

8、加速釋藥1小時(shí)累積釋藥百分?jǐn)?shù) Y與長期釋藥1天的累積釋藥百分?jǐn)?shù)y有以下相關(guān)性:Ln(100-y)=3.1192Ln(100-Y)-8.8383, R2=0.9677,加速釋藥法可以用來預(yù)測微球長期釋藥的釋放速率。
　　通過失重法間接了解PLGA微球的降解速度。采用Higuchi、零級和一級方程對體外釋藥曲線進(jìn)行擬合。結(jié)果表明鹽酸噻吩諾啡微球體外釋藥曲線符合零級方程,這主要是降解和擴(kuò)散機(jī)制共同作用的結(jié)果。
　　4鹽酸噻吩諾啡微

9、球的初步穩(wěn)定性研究
　　鹽酸噻吩諾啡微球采用60Co照射γ射線滅菌,結(jié)果顯示微球經(jīng)100萬 rad輻射后,藥物的穩(wěn)定性和微球釋藥行為與輻射前相比沒有明顯變化。影響因素實(shí)驗(yàn)表明光和熱對微球的穩(wěn)定性影響明顯。加速試驗(yàn)和長期穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果表明,鹽酸噻吩諾啡微球應(yīng)避光保存于4℃的環(huán)境中。
　　5鹽酸噻吩諾啡微球體內(nèi)過程研究
　　以對抗嗎啡鎮(zhèn)痛效果的拮抗率和拮抗維持時(shí)間長短來觀察鹽酸噻吩諾啡微球的藥效。鹽酸噻吩諾啡微球A劑量組

10、有效拮抗時(shí)間為15天,B劑量組有效拮抗時(shí)間為21天,C劑量組和D劑量組有效拮抗時(shí)間均為28天。從四個(gè)劑量的拮抗率曲線中可以發(fā)現(xiàn),鹽酸噻吩諾啡微球的有效拮抗率作用隨劑量的增大而增強(qiáng)呈劑量依賴關(guān)系。
　　以大鼠作為模型動(dòng)物,采用LC/MS/MS法測定血漿中噻吩諾啡的濃度。通過血漿藥物濃度的測定來評價(jià)微球在體內(nèi)的緩釋效果。突釋主要表現(xiàn)在注射微球后的第1天,血藥濃度達(dá)到峰值(4.79ng·mL-1),第3天以后微球的釋藥速度減慢,血藥濃度

11、和對嗎啡的拮抗作用逐漸降低。第5天后血藥濃度上升并達(dá)到平臺期(平均2.47ng·mL-1),與藥效學(xué)研究中微球在釋藥中期藥效平穩(wěn)的趨勢吻合。第21天后血藥濃度開始下降,至第28天時(shí),血藥濃度下降至(1.54ng·mL-1)。初步考察了鹽酸噻吩諾啡微球在比格犬體內(nèi)的血藥濃度,就目前得到的數(shù)據(jù)結(jié)果表明鹽酸噻吩諾啡微球在比格犬體內(nèi)的釋藥特征與在大鼠體內(nèi)類似,達(dá)到了緩釋的效果。
　　在體內(nèi)外相關(guān)性研究中,通過測定不同時(shí)間點(diǎn)微球在注射部位的

12、藥物殘留量,計(jì)算微球的體內(nèi)釋藥百分?jǐn)?shù)。用梯形法計(jì)算鹽酸噻吩諾啡微球相應(yīng)的AUC0→T,通過AUC0→T和AUC0→∞的比值作為體內(nèi)吸收百分?jǐn)?shù)(Fa)。對體內(nèi)外數(shù)據(jù)進(jìn)行點(diǎn)點(diǎn)對應(yīng)的相關(guān)性評價(jià)。體內(nèi)外相關(guān)性研究表明,鹽酸噻吩諾啡微球無論采用直接釋藥法還是透析釋藥法測定的體外釋放度與體內(nèi)釋藥百分?jǐn)?shù)及體內(nèi)吸收百分?jǐn)?shù)(Fa)之間都具有顯著的體內(nèi)外相關(guān)性。
　　對體內(nèi)釋藥曲線進(jìn)行擬合,結(jié)果表明鹽酸噻吩諾啡微球的體內(nèi)釋藥曲線符合Higuchi方程