重組人促紅細胞生成素對氧化損傷的血管內(nèi)皮細胞的保護作用.pdf

1、目的：研究重組人促紅細胞生成素對氧化損傷的血管內(nèi)皮細胞的保護作用及其作用的機制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)建立過氧化氫誘導的內(nèi)皮細胞氧化應激損傷模型，按不同濃度的重組人促紅細胞生成素(rhEPO)(1.25U/ml,2.50U/ml,5.00U/ml,10.00U/ml,20.00U/ml)分組，分別于過氧化氫(H2O2)損傷前預處理。①用噻唑藍(MTT)比色檢測細胞活力；②流式細胞儀AnnexinV-

2、FITC/PI染色檢測細胞凋亡。③免疫細胞化學法觀察rhEPO對H2O2 損傷的內(nèi)皮細胞細胞色素C表達的影響④黃嘌呤氧化法和硫代巴比妥法分別測定細胞上清的超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
　　 結(jié)果：0.1mmol/L H2O2對人臍靜脈內(nèi)皮細胞有損傷作用。①MTT法測細胞活力：H2O2 損傷組與正常對照組比較，細胞A 值明顯下降(P<0.01)，rhEPO 干預組與損傷組比較細胞A 值升高(P<0.05)。

3、②流式細胞儀檢測細胞凋亡：H2O2 損傷組細胞的凋亡率為(44.3±2.13)[％]較正常對(0.6±0.39)[％]明顯增高(P<0.01)，而給予rhEPO(5.00U/ml、10.00U/ml)預處理組凋亡率分別為(22.6±1.23)[％]，(11.7±1.01)[％](P<0.01)，較損傷組明顯降低。③細胞色素C在細胞內(nèi)的表達：正常對照組未見明顯的棕黃色顆粒，H2O2 損傷組的細胞胞漿內(nèi)可見到明顯濃染的棕黃色顆粒，rhEPO

4、 預處理組中棕黃色顆粒較損傷組減少，且隨rhEPO 濃度升高而減少。④細胞上清MDA 值和SOD 活力的測定：H2O2 損傷組MDA 較正常對照組明顯增高(P<0.01)，SOD的活力明顯減低(P<0.01)，而給予rhEPO 預處理各組較損傷組MDA 值降低(P<0.01)，SOD 活力增高(P<0.01)。
　　 結(jié)論：重組人促紅細胞生成素對氧化損傷的血管內(nèi)皮細胞具有保護作用，且呈劑量相關性，隨著rhEPO 濃度增高，其保護