IL-1β在真菌性角膜炎中的表達(dá)和調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、摘要目的：探討炎癥因子白介素1B(Interleukin一1B，IL一1B)在真菌性角膜炎中的表達(dá)及其分子調(diào)控機(jī)制。方法：采用基質(zhì)內(nèi)注射法建立小鼠真菌性角膜炎模型，以此作為大體水平的研究對(duì)象；獲取小鼠骨髓中性粒細(xì)胞，以此作為細(xì)胞水平的研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)分為四部分：(1)建立C57BL／6小鼠真菌性角膜炎模型，采用流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡觀察IL一1B在角膜組織的表達(dá)，探索真菌性角膜炎時(shí)IL一1B的主要細(xì)胞來(lái)源；(2)獲取C57BL／6、

2、TLR4／以及TRIF／／Jx鼠中性粒細(xì)胞，與煙曲霉菌株共同培養(yǎng)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和Western—blot法檢測(cè)工L一1p的表達(dá)，探索真菌性角膜炎時(shí)經(jīng)典Signal1通路對(duì)IL—lD的調(diào)控作用；(3)建立C57BL／6、NLRP3／、ASC／以及Caspase一1／一小鼠真菌性角膜炎模型，獲取C57BL／6、Dectin一卜／一、NLRP3一／一、ASC一／一以及Caspase一卜／一小鼠中性粒細(xì)胞，與煙曲霉菌共同培

3、養(yǎng)，采用ELISA和Western—blot法檢測(cè)IL—lB的表達(dá)，探索真菌性角膜炎時(shí)經(jīng)典Signal2通路對(duì)工L—lB的調(diào)控作用；(4)建立C57BL／6、Caspase一1一／一小鼠真菌性角膜炎模型，獲取C57BL／6、TLR4一／一、TRIF一／一、Dectinl／以及Caspase一1一／一小鼠中性粒細(xì)胞，與煙曲霉菌共同培養(yǎng)，采用Western—blot法檢測(cè)IL一1B、Caspase一1l和Caspase—l的表達(dá)，探索真菌性

4、角膜炎時(shí)Caspase11對(duì)工L—lB的調(diào)控作用。結(jié)果：(1)C57BL／6小鼠感染煙曲霉菌24h后，可見(jiàn)大量募集至角膜感染區(qū)域的中性粒細(xì)胞；所有能夠表達(dá)IL一1B的細(xì)胞中，922％的是中性粒細(xì)胞；中性粒細(xì)胞中能夠表達(dá)IL—lB的比例為854％。感染煙曲霉菌48h后，角膜區(qū)域出現(xiàn)較高比例的巨噬細(xì)胞；所有能夠表達(dá)工L一1B的細(xì)胞中，297％的是巨噬細(xì)胞；巨噬細(xì)胞中能夠表達(dá)IL一1B的比例為966％。(2)Signal1通路預(yù)激活后給予真菌

5、刺激，C57BL／6小鼠中性粒細(xì)胞中pro—IL一1B的表達(dá)量明顯增加，未預(yù)激活而只單純給予真菌刺激，pro—IL1B的表達(dá)量也明顯增加，但與有預(yù)激相比其增加幅度略少；TLR4一／一或TRIF／d、鼠的中性粒細(xì)胞被真菌刺激4h或18h后，pro—IL一1B的表達(dá)較未感染時(shí)明顯增多，但是與C57BL／6小鼠相比無(wú)明顯差異。(3)Deetin一卜／一小鼠或者給予sky阻斷劑的C57BL／6小鼠的中性粒細(xì)胞被真菌刺激Abstractobjec

6、tiveToinvestigatetheexpressionandmolecularmechanismsofinflammatorycytokineIL一1pinfungalkeratitisMethodsMousemodeloffungalkeratitisestablishedbyreleaseAspergillusfumigatussporesintothecornealstromawithinjectionisusedforin

7、vivoexperimentsBonemarrowcellsisolatedfrommiceareusedforinvitroexperiments(1)ToinvestigatetheexpressionofIL113inthefungalkeratitismodelofC57BL／6micewithflowcytometryandconfocalmicroscopeandtoexplorethemajorcellularsource

8、ofIL1Binfungalkeratitis(2)ToinvestigatetheexpressionofIL1BintheneutrophilsofC57BL／6，TLR4／andTRIF一／一micetreatedwithAspergillusfumigatusbyELISAandWestern—blotandtoexploretheregulationforIL1pbytheclassicSignal1pathwayinfung

9、alkeratitis(3)ToinvestigatetheexpressionofIL1pinthefungalkeratitismodelofC57BL／6，NLRP3／，ASC一／一andCaspase1／一miceandintheneutrophilsofC57BL／6，Dectin一1一／一，NLRP3一／一，ASC一／一andCaspase一1一／一micetreatedwithAspergillusfumigatusbyE

10、LISAandWestern—blotandtoexploretheregulationforIL一1BbytheclassicSignal2pathwayinfungalkeratitis(4)ToinvestigatetheexpressionofIL—lp，Caspase一11andCaspase一1inthefungalkeratitismodelofC57BL／6andCaspase1／miceandintheneutroph

11、ilsofC57BL／6，Dectin1／一，TLR4／，TRIF／andCaspase一1／micetreatedwithAspergillusfumigatusbyWestemblotandtoexploretheregulationforIL一1BbyCaspase11infungalkeratitisResults(1)Thereisapronouncedneutrophilinfiltrationtothecornealstr

12、omaofmousefungalkeratitismodelin24h922％cellsincomeaoffungalkeratitiswhichcanexpressIL1pareneutrophilsand854％neutrophilsCanexpressIL一1pTherearemanymacrophagesrecruitmenttothecornealstromain48h297％cellsincorneawhichCanexpr