煙酰胺對(duì)Toll樣受體介導(dǎo)的炎癥后色素沉著的研究.pdf

1、研究背景：
　　炎癥后色素沉著（postinflammatory hyperpigmenation，PIH）是常見(jiàn)的皮膚科問(wèn)題，可繼發(fā)于皮膚感染、炎癥、丘疹鱗屑性疾病、外傷、藥物、日曬等各種疾病或損傷。其中以痤瘡是引起的PIH最為常見(jiàn)的疾病之一，其發(fā)生率可達(dá)47.4-65.3％不等。PIH在任何膚色人群中均有發(fā)生，但在暗膚色人群中更為常見(jiàn)，并以亞洲人群最為顯著，如日本、中國(guó)。PIH可發(fā)生于任何年齡階段，男女性發(fā)生率無(wú)明顯差別?，F(xiàn)有

2、的治療方法對(duì)PIH效果并不理想。雖然部分PIH即使不經(jīng)過(guò)治療，亦可自行消褪，但通常需要3-24個(gè)月時(shí)間不等。此外，環(huán)境因素如日曬等可進(jìn)一步加重色素沉著。雖然PIH并不影響個(gè)體生存，但可在不同程度上損害容貌外觀，在精神和經(jīng)濟(jì)上對(duì)患者造成負(fù)擔(dān)。因此，探索PIH發(fā)生的機(jī)制并尋找潛在的安全有效的藥物治療是很有意義的。
　　角質(zhì)形成細(xì)胞是皮膚免疫屏障功能中的一重要組成部分，其表面表達(dá)多種Toll樣受體（Toll-like receptors

3、，TLRs）。TLRs是一組模式識(shí)別受體，可以識(shí)別病原相關(guān)分子模式。其中TLR-2主要識(shí)別革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁成分:肽聚糖(peptidoglycan，PGN)及脂磷壁抗原相關(guān)分子酸(lipoteichoic acid，LTA); TLR-4則主要識(shí)別革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分:脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），也即內(nèi)毒素。作為痤瘡發(fā)生的致病因素之一的痤瘡丙酸桿菌(Propionibacteriurn acnes，P

4、.acnes)是革蘭氏陽(yáng)性菌，已由研究顯示P.acnes引起炎癥的主要途徑是通過(guò)其細(xì)胞壁主要成分PGN及LTA與宿主細(xì)胞表面TLR-2結(jié)合所致，也有部分報(bào)道發(fā)現(xiàn)P.acnes對(duì)于TLR-4也有弱激動(dòng)效應(yīng)。因此，我們可以利用PGN、LTA、LPS這些細(xì)胞壁成分干預(yù)角質(zhì)形成細(xì)胞，體外模擬痤瘡炎癥環(huán)境，在此基礎(chǔ)上探討TLR-2/4與炎癥后色素沉著的關(guān)系，并篩選治療PIH潛在有效的藥物。
　　研究目的：
　　本課題旨在討論角質(zhì)形成細(xì)

5、胞TLR-2/4介導(dǎo)的PIH形成機(jī)制，并在此基礎(chǔ)上篩選治療PIH潛在有效的藥物。
　　研究方法：
　　一、TLR-2/4介導(dǎo)的炎癥及色素合成相關(guān)因子表達(dá)
　　本部分?jǐn)M用TLR-2激動(dòng)劑(PGN、LTA)及TLR-4激動(dòng)劑(LPS)選取不同時(shí)間點(diǎn)刺激HaCaT細(xì)胞，建立體外角質(zhì)形成細(xì)胞TLR-2/4介導(dǎo)的炎癥模型。用Realtime PCR及ELISA檢測(cè)分別TLR-2/4介導(dǎo)的炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達(dá)。
　　

6、為確定不同細(xì)菌來(lái)源的細(xì)胞壁成分對(duì)TLR-2/4介導(dǎo)的PIH是否有差異，本課題選取不同細(xì)菌來(lái)源的PGN，用上述方法檢測(cè)炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達(dá)。為進(jìn)一步確定TLR-2/4是否直接參與PIH，用siRNA對(duì)TLR-2及TLR-4基因表達(dá)分別進(jìn)行干預(yù)后，用上述方法檢測(cè)炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達(dá)。
　　二、肌醇、泛醇、煙酰胺對(duì)TLR-2/4介導(dǎo)的PIH的作用
　　本部分?jǐn)M用不同濃度梯度的肌醇、泛醇及煙酰胺分別作用于TLR-2/

7、4介導(dǎo)的PIH模型，用Realtime PCR及ELISA檢測(cè)炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達(dá)，確定潛在有效的藥物及其有效濃度范圍。
　　研究結(jié)果：
　　一、TLR-2/4介導(dǎo)的炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達(dá)
　　用TLR-2激動(dòng)劑(PGN、LTA)及TLR-4激動(dòng)劑(LPS)刺激HaCaT細(xì)胞，IL-8mRNA表達(dá)在0-12h時(shí)隨時(shí)間增加而增加(p＜0.05 vs.control)，在12-24h時(shí)表達(dá)水平略有下降，但與對(duì)

8、照相比，仍呈顯著性升高(p＜ 0.05 vs.control)。而在相同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，IL-8 mRNA表達(dá)在LPS及PGN組中升高較LTA組明顯。類(lèi)似地，POMC mRNA表達(dá)在0-24h時(shí)隨時(shí)間增加而增加，在24h時(shí)表達(dá)水平最高(p＜0.05 vs.control)。同樣地，在相同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，POMC mRNA表達(dá)上調(diào)以L(fǎng)PS組及PGN組更為明顯。
　　為確定不同細(xì)菌來(lái)源的細(xì)胞成分對(duì)TLRs介導(dǎo)的PIH是否有影響，我們采用了金黃色葡

9、萄球菌細(xì)胞壁中的PGN（PGN from Staphylococcus aureus，PGN-SA）以及大腸埃希菌細(xì)胞壁中的PGN（PGN from Esherichia coli，PGN-EB），分別干預(yù)HaCaT細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)兩組IL-8 mRNA及POMC mRNA水平無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論：TLR-2/4激動(dòng)劑可顯著性誘導(dǎo)炎癥因子IL-8黑素合成因子POMC的高表達(dá);不同細(xì)菌來(lái)源的TLR-2激動(dòng)劑對(duì)炎癥及黑素

10、合成相關(guān)因子表達(dá)無(wú)顯著性差異，因此可推測(cè)痤瘡相關(guān)的PIH與TLR-2/4信號(hào)通路途徑激活相關(guān)，色素沉著是機(jī)體在維持炎癥穩(wěn)態(tài)過(guò)程中所付出的代價(jià)。
　　二、肌醇、泛醇、煙酰胺對(duì)TLR-2/4介導(dǎo)的PIH的作用
　　將肌醇及泛醇按照不同濃度梯度分別加入到PGN誘導(dǎo)的PIH模型中發(fā)現(xiàn)，隨兩者濃度的增加，IL-8及POMC mRNA水平無(wú)顯著變化(p＞0.05);而將煙酰胺按照不同濃度梯度加入到PGN誘導(dǎo)的PIH模型中后發(fā)現(xiàn)，IL-8