Leydig細(xì)胞中Toll樣受體(TLR)介導(dǎo)的睪丸天然免疫反應(yīng).pdf

1、背景與目的:睪丸是免疫豁免組織,然而睪丸仍能有效的清除感染,說明睪丸自身具有抵抗病原體的機(jī)制。本論文的主要目的是研究Leydig細(xì)胞在睪丸中的天然免疫功能。睪丸巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出較低的免疫活性,其機(jī)理尚不清楚,我們研究了Leydig細(xì)胞對巨噬細(xì)胞免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)。
　　 材料與方法:利用C57/BL6小鼠為模型分離純化小鼠Leydig細(xì)胞。利用定量實(shí)時(shí)RT-PCR(Q-PCR)分析基因mRNA的水平。使用Western blottin

2、g和免疫組化染色研究蛋白的表達(dá)定位。ELISA檢測細(xì)胞因子產(chǎn)生和睪酮合成。利用基因敲除小鼠模型研究TAM受體在TLR介導(dǎo)天然免疫反應(yīng)中的作用。
　　 結(jié)果:小鼠Leydig細(xì)胞中表達(dá)較高水平的TLR3和TLR4,以及較低水平的TLR2、TLR7、TLR9和TLR12,但不表達(dá)其它TLR。Leydig細(xì)胞中的TLR3和TLR4可被其受體激活,會引起核因子κB(NF—κB)和干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)的活化,進(jìn)而誘導(dǎo)該細(xì)胞分泌炎癥

3、因子(IL-1β,IL-6和TNF-α)和Ⅰ型干擾素(IFN-α及IFN-β),對入侵病原體產(chǎn)生免疫防御作用。為防止睪丸組織持續(xù)產(chǎn)生慢性炎癥反應(yīng),Leydig細(xì)胞中TLR3和TLR4受體的激活必須受到嚴(yán)格的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)Leydig細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)Axl和Mer受體,它們以協(xié)同的方式抑制TLR3和TLR4信號傳導(dǎo),調(diào)節(jié)Leydig細(xì)胞的天然免疫反應(yīng)。敲除Axl及Mer雙基因敲除(Axl-/-Mer-/-)小鼠的Leydig細(xì)胞中TLR3和

4、TLR4激活水平顯著升高。Gas6是TAM受體的特異性配體,可以顯著抑制Leydig細(xì)胞中TLR-介導(dǎo)的NF-κB和IRF-3的激活及炎癥因子的表達(dá),而這種抑制效應(yīng)在Axl-/-Mer-/-Leydig細(xì)胞中則不存在。這些結(jié)果說明Axl和Mer受體酪氨酸激酶在Leydig細(xì)胞中以協(xié)同的方式負(fù)調(diào)控TLR信號。另外我們發(fā)現(xiàn)TLR3與TLR4的活化可以抑制Leydig細(xì)胞合成睪酮的能力。實(shí)驗(yàn)表明Leydig細(xì)胞可以抑制巨噬細(xì)胞的免疫反應(yīng)能力,