耐喹諾酮類銅綠假單胞菌的耐藥性及分子耐藥機制研究.pdf

1、目的： 銅綠假單胞菌(Pa)為條件致病菌，是引起院內感染最常見的病原菌之一。近年來隨著β-內酰胺類、免疫抑制劑、腫瘤化療藥物的廣泛應用，由該菌引起的院內感染率逐年上升，對抗生素的耐藥性也呈逐年上升趨勢，臨床治療日趨困難。喹諾酮類抗生素是唯一可與β-內酰胺類相媲美的合成抗菌藥物，以環(huán)丙沙星為代表，因其良好的藥代動力學特點，強大的殺菌活性廣泛應用于臨床銅綠假單胞菌感染的治療，隨著該類藥物的大量使用，銅綠假單胞菌對喹諾酮類的耐藥率不斷

2、上升。本研究對廣州地區(qū)的耐喹諾酮類銅綠假單胞菌的耐藥性、耐藥相關基因的突變、部分外膜蛋白等進行研究，并結合其流行病學特征，初步探討銅綠假單胞菌耐喹諾酮類抗生素的分子耐藥機制，為指導臨床合理使用抗生素以及控制耐藥菌株的傳播提供科學依據。 方法： 1．選擇103株臨床分離的的非重復的銅綠假單胞菌，用VITEK-2系統(tǒng)測定其對18種常用抗生素的MIC，對藥物敏感性進行分析。并篩選出耐喹諾酮類銅綠假單胞菌。 2．采用IA

3、TS分型血清對菌株進行血清學分型，了解廣州地區(qū)喹諾酮耐藥銅綠假單胞菌的血清型別分布情況，結合耐藥譜分析，建立從表型上簡單快速的判定菌株流行情況的方法。 3．采用PCR方法擴增第二類拓撲異構酶gyrA、gyrB、parC和parE基因的喹諾酮藥物耐藥決定區(qū)(QRDR)片段，分別對gyrA、parC基因的PCR產物進行多聚酶鏈反應-限制性內切酶片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析，檢測銅綠假單胞菌gyrA基因和parC基因的突變，

4、并對部分菌株的gyrB基因和parE基因的核昔酸序列進行測定，探討基因突變與銅綠假單胞菌對喹諾酮類耐藥性的關系。 4．采用外排泵抑制劑碳酰氰基-對-氯苯腙(CCCP)對菌株進行作用，觀察其降低喹諾酮類抗生素MIC、減少其主動外排的作用；同時提取Pa的外膜蛋白，并用SDS-PAGE對外膜蛋白進行分析，探討其與耐藥性的關系。結論： 1．廣州地區(qū)環(huán)丙沙星耐藥銅綠假單胞菌對多種抗生素呈多重耐藥和交叉耐藥。對于這些菌株感染的治療，

5、可選擇哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、亞胺培南、美羅培南、哌拉西林等藥物。 2．銅綠假單胞菌的血清學分型方法，可以快速、簡單地監(jiān)測這些菌株的院內感染流行情況。 3．gyrA基因第83位氨基酸密碼子突變是銅綠假單胞菌對喹諾酮類耐藥的主要耐藥機制，同時合并發(fā)生gyrB、parC或parE基因突變可提高菌株的耐藥水平。PCR-RFLP方法可以快速簡便地檢測出耐喹諾酮類銅綠假單胞菌gyrA基因第83位氨基酸密碼子突變株和parC基