腸炎沙門菌對(duì)喹諾酮類藥物耐藥性及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、前言
　　沙門菌是威脅人類生命健康的重要病原菌，廣泛存在于自然界，至今已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的血清型有2579種。然而，各型沙門菌的致病力差別明顯，如傷寒和副傷沙門菌常引起傷寒和副傷寒等腸熱癥，甚至引起敗血癥導(dǎo)致死亡;鴨沙門菌常引起無(wú)癥狀感染;豬霍亂沙門菌常引起敗血癥和遷徙性病灶;鼠傷寒沙門菌常致痢疾樣表現(xiàn);腸炎沙門菌常引起胃腸炎。根據(jù)世界衛(wèi)生組織掌握的資料，在食源性疾病危險(xiǎn)因素中，細(xì)菌性食物中毒仍是首要危害，是食源性疾病最主要的危險(xiǎn)因素。其中

2、沙門菌是全球報(bào)道最多、各國(guó)公認(rèn)的食源性疾病引起感染性腹瀉的首要致病菌。而非傷寒沙門菌引起的許多公共衛(wèi)生事件被各種傳媒廣泛報(bào)道而影響到全球范圍的相關(guān)食品貿(mào)易。腸炎沙門菌是非傷寒沙門菌中常見(jiàn)的血清型之一，是造成感染性腹瀉病例的優(yōu)勢(shì)菌型。
　　目前，臨床上治療沙門菌感染首選喹諾酮類和三代頭孢菌素類抗菌藥物。近年來(lái)，孟加拉國(guó)、印度、泰國(guó)、越南、塔吉克斯坦、英國(guó)、美國(guó)等國(guó)家和地區(qū)相繼報(bào)道了一些對(duì)萘啶酸和環(huán)丙沙星等喹諾酮類藥物具有抗性的MDR

3、(multidrugresistance)沙門菌。人群中喹諾酮類藥物耐藥的沙門菌，尤其是多重耐藥的沙門菌在世界各地陸續(xù)被報(bào)道，這類細(xì)菌常出現(xiàn)喹諾酮類藥物耐藥性上升，容易導(dǎo)致臨床治療時(shí)間延長(zhǎng)，復(fù)發(fā)感染，發(fā)病率和死亡率增高。耐藥性沙門菌耐藥譜的擴(kuò)展，給沙門菌病的治療帶來(lái)了極大困難，成為公共健康的潛在威脅而引起人們的廣泛關(guān)注。
　　對(duì)于沙門菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥機(jī)制國(guó)內(nèi)外已有較多的研究和報(bào)道，其對(duì)喹諾酮類藥物耐藥的主要原因是喹諾酮類藥物

4、耐藥決定區(qū)(QRDR)的DNA螺旋酶（gyrA和gyrB）和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ（parC和parE）位點(diǎn)的突變。DNA螺旋酶是喹諾酮類藥物作用的首要靶位，而其喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)是喹諾酮類藥物作用的主要靶位。由此可見(jiàn)監(jiān)測(cè)腸炎沙門菌的耐藥性并檢測(cè)其耐藥基因?qū)θ祟惛腥灸c炎沙門菌的預(yù)防和控制具有重大意義。
　　實(shí)驗(yàn)方法
　　1、腸炎沙門菌的耐藥性
　　瓊脂稀釋法測(cè)定萘啶酸、左氧氟沙星、加替沙星、環(huán)丙沙星的最小抑菌濃度(MI

5、C)，分析耐藥特點(diǎn)。
　　2、腸炎沙門菌對(duì)四種喹諾酮類藥物耐藥基因的檢測(cè)
　　通過(guò)煮沸法粗提取模版DNA、PCR擴(kuò)增、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖電泳以及最后的核苷酸序列測(cè)定，對(duì)腸炎沙門菌進(jìn)行耐藥基因的檢測(cè)與分析。
　　結(jié)果
　　1、腸炎沙門菌耐藥特點(diǎn)
　　55株腸炎沙門菌對(duì)萘啶酸耐藥率極高(96.36％)，80％對(duì)環(huán)丙沙星敏感性下降，9.09％對(duì)環(huán)丙沙星低水平耐藥，9.09％對(duì)環(huán)丙沙星高水平耐藥，僅1株對(duì)環(huán)丙沙星

6、敏感(1.82％)，90.91％對(duì)左氧氟沙星敏感，92.73％對(duì)加替沙星敏感，其中4株(7.27％)對(duì)四種藥物均耐藥。
　　2、腸炎沙門菌耐藥基因分析
　　對(duì)萘啶酸耐藥的腸炎沙門菌均發(fā)生gyrA基因Ser83位密碼子或Asp87位密碼子突變;對(duì)萘啶酸及環(huán)丙沙星低水平耐藥的腸炎沙門菌中除發(fā)生gyrA基因突變外，還同時(shí)出現(xiàn)parC基因突變;對(duì)四種喹諾酮類藥物均耐藥的4株腸炎沙門菌中同時(shí)出現(xiàn)gyrA、parC、parE基因突變;未

7、發(fā)現(xiàn)gyrB基因突變。
　　結(jié)論
　　1、腸炎沙門菌對(duì)萘啶酸耐藥率極高，對(duì)環(huán)丙沙星敏感性下降，而對(duì)左氧氟沙星及加替沙星較敏感。
　　2、gyrA基因單突變即可導(dǎo)致沙門菌對(duì)萘啶酸高度耐藥及環(huán)丙沙星敏感性下降，其中Ser83是耐藥性產(chǎn)生的重要位點(diǎn)，突變頻率最高。
　　3、parC突變不頻繁，且常伴gyrA突變，在環(huán)丙沙星低水平耐藥性中發(fā)揮作用。
　　4、parE突變能提高gyrA突變和parC突變分離株的耐藥性