造血干-祖細(xì)胞體內(nèi)歸巢能力源間差異性研究.pdf

1、目的：有研究表明不同來(lái)源的造血干細(xì)胞的一些歸巢相關(guān)分子表達(dá)存在差異，這可能與臍血造血干細(xì)胞植入能力低下有關(guān)。本研究旨在通過(guò)研究不同來(lái)源人CD34+細(xì)胞在NOD/SCID小鼠體內(nèi)歸巢來(lái)驗(yàn)證臍血(UCB)來(lái)源HSC體內(nèi)歸巢能力是否與其表達(dá)歸巢相關(guān)分子CXCR4相關(guān)。 材料與方法：利用Ficoll-Hypaque分離液(密度為1.077g/L)從UCB、動(dòng)員外周血(mPB)和骨髓(BM)中分得單個(gè)核細(xì)胞，再經(jīng)免疫磁珠法(MACS)富集

2、純化CD34+細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)分選后CD34+細(xì)胞的純度及其膜表面CXCR4的表達(dá)。CD34+細(xì)胞或標(biāo)記熒光染料CFSE的CD34+細(xì)胞(5×105～1×106個(gè)細(xì)胞/只)由尾靜脈注射至照射的NOD/SCID小鼠。移植后20小時(shí)處死小鼠。FACS檢測(cè)移植鼠骨髓和脾臟中已歸巢不同來(lái)源的人CD34+細(xì)胞。鼠股骨制成組織切片在熒光顯微鏡下觀察。 結(jié)果：我們從UCB、mPB和BM中分得(1.63±0.36)×104/mL

3、，(2.10±0.29)×108/mL，(7.19±0.74)×106/mLCD34+細(xì)胞。經(jīng)MACS富集的CD34+細(xì)胞純度達(dá)(93.67±2.80)％。新鮮UCB、凍存UCB、mPB和BMCD34+細(xì)胞膜表面CXCR4表達(dá)率分別為(49.52±1.12)％，(46.12±2.29)％，(48.50±2.48)％和(65.39±1.27)％。新鮮UCB、凍存UCB、mPB和BMCD34+細(xì)胞在NOD/SCID小鼠骨髓歸巢效率分別為(3

4、.18±0.29)％，(3.06±0.18)％，(4.38±0.36)％和(5.76±0.52)％。新鮮UCB、凍存UCB、mPB和BMCD34+細(xì)胞在NOD/SCID小鼠脾臟歸巢效率分別為(1.88±0.12)％，(1.80±0.15)％，(1.90±0.22)％和(2.16±0.34)％。 結(jié)論：我們的結(jié)果顯示UCBCD34+細(xì)胞膜表面CXCR4水平低于mPB和BM。經(jīng)凍存復(fù)蘇后，UCBCD34+細(xì)胞膜表面CXCR4水平有所