SDF-1-CXCR4趨化作用與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移效應(yīng)的相關(guān)性實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文SDF1CXCR4趨化作用與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移效應(yīng)的相關(guān)性實驗研究姓名：刁鑫偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：陳正堂20090501第三軍醫(yī)大學(xué)博十學(xué)位論文PC一3與高表達(dá)SDFla的骨髓內(nèi)皮細(xì)胞BMEC—l共培養(yǎng)，分析前列腺癌細(xì)胞對骨髓內(nèi)皮細(xì)胞的遷移效應(yīng)。將轉(zhuǎn)染CXCR4基因前列腺癌細(xì)胞株種植于SCID小鼠前列腺包膜下，觀察前列腺癌的骨轉(zhuǎn)移效應(yīng)，分析SDF1／CXCR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在前列腺癌轉(zhuǎn)移及粘附過程中

2、的作用及分子機理，為前列腺癌骨轉(zhuǎn)移機制提供新的實驗依據(jù)。方法1收集148例手術(shù)切除及穿刺確診前列腺癌存檔蠟塊。應(yīng)用免疫組化方法檢測前列腺癌組織、前列腺增生組織中CXCR4蛋白的表達(dá)，分析其不同表達(dá)與年齡、雄激素受體(AR)、病理分級和轉(zhuǎn)移等臨床特征的關(guān)系。進(jìn)一步用免疫組化方法CD34標(biāo)記計數(shù)腫瘤間質(zhì)微血管密度(MVD)，觀察前列腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)分子VEGF及MMP9與微血管密度的關(guān)系。2分離健康人外周血單個核細(xì)胞，提取總RNA，以其為模板，

3、RT—PCR法擴增CXCR4，獲取CXCR4基因全長序列，裝入帶有綠色熒光蛋白(GFP)的逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒pLEGFP—N1，用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞，采用實時定量PCR和w色stemblotting觀察CXCR4表達(dá)情況，并通過體外細(xì)胞基質(zhì)粘附試驗和Transwells小室檢測腫瘤細(xì)胞體外侵襲能力的變化。3趨化因子SDF1誘導(dǎo)培養(yǎng)CXCR4穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞24h后，實時定量RTPCR和westemblotting方法檢測粘附分子LFA

4、一1叭CAM1、VLA一4ⅣCAM1及rIl】ⅢA及蛋白表達(dá)情況，實時定量PCR和EMSA方法檢測HⅢ一lu及P65NF1cB的mRNA水平及DNA結(jié)合活性。探討前列腺癌細(xì)胞SDF1佗XCR4生物軸功能增強對上述分子表達(dá)的影響。4接種人前列腺癌PC一3、轉(zhuǎn)染CXCR4的PC一3以及LNcap細(xì)胞于雄性SCD小鼠皮下，建立scID小鼠人前列腺癌移植模型及原位轉(zhuǎn)移模型，觀察小鼠活動、移植成瘤率、腫瘤生長及形態(tài)學(xué)特征，以免疫組化檢測cxcR4