骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對前列腺癌血管生成擬態(tài)的影響及前列腺癌骨轉(zhuǎn)移相關(guān)機制的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.研究人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對人前列腺癌PC-3細(xì)胞系及22RV1細(xì)胞系增殖，遷移，侵襲及血管生成擬態(tài)等生物學(xué)特性的影響，并初步探討其影響血管生成擬態(tài)過程中的相關(guān)分子機制；
　　2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細(xì)胞株中分選人前列腺癌類干細(xì)胞，并鑒定其相應(yīng)生物學(xué)特性；
　　3.探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）的配體羅格列酮對前列腺癌PC-3細(xì)胞系增殖，遷移，侵襲及血管生成擬態(tài)的影響，并初步探

2、討其相關(guān)分子機制。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細(xì)胞系及22RV1細(xì)胞系，應(yīng)用CCK-8法觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對前列腺癌細(xì)胞增殖的影響；通過體外劃痕實驗及侵襲實驗觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對前列腺癌細(xì)胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng)，觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對前列腺癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry，VM)形成的影響。通過裸鼠皮下成瘤實驗觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對

3、前列腺癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤及血管生成擬態(tài)形成的影響。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)前列腺癌細(xì)胞后通過RT-PCR及western blot等方法觀察其CXCR4的表達(dá)變化，并通過CXCR4抑制劑AMD3100、PI3K抑制劑LY294002及慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)研究SDF-1/CXCR4軸及PI3K/Akt通路在該過程中的作用；
　　2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細(xì)胞株中分選出CD133+/CD44+細(xì)胞，通過免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)

4、、CCK8及平板克隆形成實驗鑒定其表面標(biāo)志物表達(dá)情況及腫瘤干細(xì)胞相關(guān)特性，通過裸鼠皮下成瘤實驗研究分選前后細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力；
　　3.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細(xì)胞系，應(yīng)用CCK-8法觀察羅格列酮不同濃度和不同作用時間對前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的影響；通過體外劃痕實驗及侵襲實驗觀察羅格列酮對PC-3細(xì)胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng)，觀察羅格列酮對PC-3細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成和VEGF產(chǎn)生的影響；并通過RT

5、-PCR及western blot等方法觀察研究VEGF及PI3K/Akt通路在該過程中的作用。
　　結(jié)果：
　　1.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可促進前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖、遷移及侵襲；前列腺癌PC-3細(xì)胞和22RV1細(xì)胞在體外三維培養(yǎng)條件下能夠形成形成環(huán)狀和網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在體外實驗及裸鼠體內(nèi)試驗中可促進前列腺癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)的形成。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上調(diào)了兩種前列腺癌細(xì)胞系CXCR4的表達(dá)，慢病毒介導(dǎo)的RNA干

6、擾技術(shù)抑制CXCR4表達(dá)后可抑制兩種細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成。CXCR4抑制劑AMD3100和PI3K抑制劑LY294002可阻斷人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或SDF-1誘導(dǎo)的血管生成擬態(tài)形成；
　　2.經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細(xì)胞比例為0.50％；免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達(dá)；其細(xì)胞增殖和克隆形成率高于PC-3細(xì)胞；以低密度注射時，其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC-3細(xì)胞；
　　3.羅

7、格列酮可明顯抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖、遷移及侵襲。同時羅格列酮可抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞在體外三維培養(yǎng)條件下形成環(huán)狀和網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)，并抑制其VEGF mRNA表達(dá)及蛋白水平分泌。羅格列酮能夠抑制PC-3細(xì)胞Akt磷酸化。
　　結(jié)論：
　　1.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可促進前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及血管生成擬態(tài)形成；人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進前列腺癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成可能是通過上調(diào)其CXCR4表達(dá)并激活PI3K/Akt通路起作用