前列腺癌及其骨轉(zhuǎn)移灶miRNA差異表達(dá)的研究.pdf

1、目的:近年來，我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率有顯著增長(zhǎng)的趨勢(shì)，在許多情況下，原發(fā)腫瘤沒有癥狀或術(shù)后并無復(fù)發(fā)，卻發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其中骨轉(zhuǎn)移最為常見。前列腺癌一旦發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，即已進(jìn)入腫瘤晚期，約70％的前列腺癌患者死于骨轉(zhuǎn)移。越來越多證據(jù)顯示，miRNA在腫瘤轉(zhuǎn)移中起著重要作用，控制腫瘤轉(zhuǎn)移。最近發(fā)現(xiàn)某些miRNA缺乏能加速腫瘤擴(kuò)散，可推測(cè)這些miRNA能發(fā)揮抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。本實(shí)驗(yàn)試圖通過比較前列腺癌原發(fā)灶及其骨轉(zhuǎn)移灶中miRNA表達(dá)量，尋找差異表

2、達(dá)的miRNA，探討其意義并進(jìn)行后續(xù)研究。
　　 材料和方法:
　　 人體前列腺癌及配對(duì)骨轉(zhuǎn)移標(biāo)本6對(duì)；非配對(duì)前列腺癌組織標(biāo)本22個(gè)，前列腺骨轉(zhuǎn)移組織標(biāo)本16個(gè)，均為石蠟標(biāo)本。提取出總RNA并鑒定質(zhì)量。采用miRNA芯片技術(shù)篩選差異表達(dá)的miRNA，并確定IScore(d)1>2且差異倍數(shù)為2倍以上時(shí)，q-value(％)≤5為有意義的差異表達(dá)miRNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法在17個(gè)前列腺癌標(biāo)本和13個(gè)骨轉(zhuǎn)移標(biāo)本

3、中驗(yàn)證10個(gè)芯片差異表達(dá)的miRNA。
　　 結(jié)果:
　　 一、芯片篩選miRNA
　　 1.配對(duì)樣本差異表達(dá)hsa-miR。僅1對(duì)配對(duì)樣本的總RNA量達(dá)到芯片所需用量，故僅對(duì)此一對(duì)樣本進(jìn)行基因芯片分析，發(fā)現(xiàn)相對(duì)原發(fā)癌部位，轉(zhuǎn)移灶中高表達(dá)的miRNA有18個(gè)，低表達(dá)有3個(gè)，后者分別是hsa-m1R-612、hsa-m1R-143與hsa-miR-145。
　　 2.非配對(duì)樣本差異表達(dá)hsa-miR。前列腺

4、癌及骨轉(zhuǎn)移組織非配對(duì)miRNA表達(dá)結(jié)果顯示，在骨轉(zhuǎn)移組織中miR-143、miR-145、miR-100、miR-125b低表達(dá)最為顯著，表達(dá)差異均超過4倍。
　　 一、miRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)
　　 比較腫瘤原發(fā)標(biāo)本和轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)m1R-143、miR-145、miR-100及miR-125b在骨轉(zhuǎn)移組織中較原發(fā)腫瘤的表達(dá)下調(diào)與芯片結(jié)果一致，倍數(shù)分別為15倍、21倍、2倍及3倍。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

5、顯示，與前列腺癌原發(fā)灶組織相比較，轉(zhuǎn)移灶中m1R-143、miR-145及m1R-125b的下調(diào)差異有顯著性意義。
　　 結(jié)論:
　　 一、前列腺癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中存在多個(gè)差異表達(dá)的miRNA。
　　 二、hsa-mir-143、hsa-mir-145與hsa-mir-125b低表達(dá)量最為明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 三、hsa-mir-143、hsa-mir-145與hsa-mir--125b在轉(zhuǎn)移