版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、目的: 暴發(fā)性肝衰竭(FHF)是一種以凝血酶原時間延長和肝性腦病為主要特征的臨床疾病,而腦水腫繼發(fā)腦疝是死亡的主要原因。目前研究表明,血管源性腦水腫和細胞毒性腦水腫可能同時參與FHF時腦水腫的形成過程。同時Hill DB等證實了血腦屏障(BBB)通透性增加是FHF引發(fā)血管源性腦水腫的主要發(fā)病機制。BBB結(jié)構(gòu)中最重要的是緊密連接(TJ)。目前關(guān)于TJ分子結(jié)構(gòu)的研究很多,但病理條件下TJ相關(guān)蛋白,尤其是對其功能調(diào)節(jié)蛋白occludi
2、n的研究還很少。 復(fù)方甘草酸苷(Glycyrrhizin)作為強有力的肝細胞膜保護劑,具有保護肝細胞、抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抑制病毒、類固醇激素樣等作用。有研究證實復(fù)方甘草酸苷可以通過降低細胞因子IL-1、IL-6及TNF-α水平對重癥肝炎小鼠發(fā)揮保護作用。本研究旨在弄清復(fù)方甘草酸苷能否通過改變occludin蛋白的分布或表達來影響血腦屏障的通透性。實驗通過觀察FHF模型組和Glycyrrhizin處理組occludin蛋白的分布及表
3、達,來揭示復(fù)方甘草酸苷降低肝衰竭時血腦屏障通透性的保護作用。 材料與方法: 1、動物模型制備 實驗動物為400只雄性Balb/c小鼠,隨機分為5組。1組:生理鹽水對照組,2組:內(nèi)毒素(LPS)對照組,3組:D氨基半乳糖(GalN)對照組,4組:暴發(fā)性肝衰竭模型組(LPS+GalN),5組:保護組(LPS+GalN+Glycyrrhizin)。各組40只小鼠,其中20只檢測BBB通透性,另20只留血、腦組織和肝臟組
4、織待檢。 2、血清ALT水平的測定 應(yīng)用生物化學方法檢測血清ALT水平,以明確暴發(fā)性肝衰竭時肝臟功能生化學改變。 3、EB含量的測定 處死動物前2h尾靜脈注射伊文思藍(EB),取腦組織溶于甲酰胺,離心取上清于波長632nm進行比色,根據(jù)標準曲線計算出單位腦組織EB含量,以此評價BBB通透性的變化。 4、HE染色法觀察 對留取的肝、腦組織進行HE染色,光鏡下觀察各組病理形態(tài)學改變。
5、5、免疫組化檢測 應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測occludin蛋白在腦組織中的分布與表達。血管內(nèi)皮細胞胞漿內(nèi)棕褐色染色,或于細胞漿內(nèi)沿胞膜有棕褐色線形染色者為陽性細胞。 6、Western blot方法 應(yīng)用Western blot方法對occludin蛋白的表達作半定量分析。 7、實時定量PCR檢測 應(yīng)用Trizol試劑提取腦組織RNA,利用實時定量PCR對occludin mRNA的表達作相對定量分析
6、。采用SYBR Green I熒光染料嵌合法,以構(gòu)建的RNA為標準品,分別對目的基因(occludin基因)和管家基因(GAPDH)制作標準曲線,利用標準曲線對樣品中的目的基因和管家基因分別進行定量。通過管家基因的校正,檢測各種樣品occludin mRNA的相對表達量。 8、數(shù)據(jù)處理 結(jié)果:用平均數(shù)±標準差表示,并采用方差分析的方法,以P<0.05為差異具有顯著性。 實驗結(jié)果 1、復(fù)方甘草酸苷在FHF動
7、物模型中的作用: LPS/GaIN聯(lián)合注射后動物出現(xiàn)懶動,進食能力下降,9h后血清ALT明顯升高,較其它對照組有顯著性差異(P<0.01)。肝臟出現(xiàn)出血性大塊或亞大塊肝壞死,病理改變類似暴發(fā)性肝衰竭,總死亡率達70.6%。應(yīng)用Glycyrrhizin預(yù)先注射,動物死亡率顯著下降至40%,血清ALT水平明顯降低,肝臟病理變化明顯減輕。 2、EB含量測定結(jié)果 暴發(fā)性肝衰竭組小鼠腦組織EB含量明顯增高,較其它對照組均
8、有顯著性差異(P<0.05);在用Glycyrrhizin預(yù)先進行保護后,腦組織中EB含量較暴發(fā)性肝衰竭組明顯降低(P<0.05)。 3、腦組織H染色 各組腦組織HE染色切片中未發(fā)現(xiàn)有明顯異常表現(xiàn)。 4、腦組織occludin蛋白的表達: 利用免疫組化方法檢測到在肝衰竭組中,血管內(nèi)陽性染色明顯減弱,甚至在整張切片上很難見到陽性染色信號。在western blot分析中,發(fā)現(xiàn)相同組中occludin蛋白的表
9、達量減弱,經(jīng)過Glycyrrhizin預(yù)先進行保護后,腦組織內(nèi)免疫組化陽性染色信號明顯增加,western blot分析也表明蛋白表達量明顯增加。 5、腦組織occludin mRNA的表達 利用熒光定量PCR法檢測occludin mRNA的相對含量,各組之間無顯著性差異 結(jié)論: 1、復(fù)方甘草酸苷預(yù)保護可阻斷小鼠FHF的發(fā)生,證明復(fù)方甘草酸苷對暴發(fā)性肝衰竭小鼠有保護作用。 2、復(fù)方甘草酸苷組腦組
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 急性肝衰竭小鼠模型中血清TNFα對血腦屏障通透性的影響.pdf
- 暴發(fā)性肝衰竭小鼠模型中腫瘤壞死因子α對血腦屏障通透性及緊密連接蛋白occludin表達的影響.pdf
- 復(fù)方甘草酸苷對免疫性肝損傷小鼠干預(yù)作用研究.pdf
- 復(fù)方甘草酸苷膠囊最佳的肝保護劑
- 復(fù)方甘草酸苷制劑對皮膚斑貼試驗的影響.pdf
- 復(fù)方甘草酸苷對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型炎癥影響的研究.pdf
- LPS對體外血腦屏障通透性的影響及其機制研究.pdf
- 銀杏內(nèi)酯A的血腦屏障通透性研究.pdf
- 頸淋巴阻滯對大鼠血腦屏障通透性的影響.pdf
- 高壓氧對腦缺血再灌注小鼠血腦屏障通透性的影響.pdf
- 燈盞花素對腦缺血再灌注小鼠血腦屏障通透性的影響.pdf
- 甘草酸苷對急性肝壞死小鼠腸分泌成分表達減少的影響及機制研究.pdf
- 缺氧缺血對體外血腦屏障通透性的影響及其機制的研究.pdf
- 復(fù)方甘草酸苷片的研制及體外代謝研究.pdf
- 納米氧化鋁對血腦屏障模型通透性影響及機制的體外研究.pdf
- 經(jīng)顱腦超聲造影對血腦屏障通透性的影響及機理研究.pdf
- 嗜鉻粒蛋白A衍生多肽CHR對膿毒癥小鼠血腦屏障通透性的影響.pdf
- 腫瘤壞死因子對急性肝衰竭小鼠模型腸粘膜通透性的影響.pdf
- 不同參數(shù)電磁輻射對血腦屏障通透性的影響.pdf
- 注射用復(fù)方甘草酸苷的研制及其質(zhì)量研究.pdf
評論
0/150
提交評論