高壓氧對(duì)腦缺血再灌注小鼠血腦屏障通透性的影響.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文高壓氧對(duì)腦缺血再灌注小鼠血腦屏障通透性的影響姓名：趙紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：張海鵬2003.3.13腦皮質(zhì)血流檢測(cè)：用激光多普勒血流儀監(jiān)測(cè)腦皮質(zhì)血流，打開(kāi)顱腔，選擇測(cè)定腦血流，于缺血前、缺血10分鐘、20分鐘、30分鐘，再灌注4小時(shí)、1l小時(shí)、23小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)分別測(cè)定腦皮質(zhì)血流值。4組織依文思蘭(Evansblue，EB)定量測(cè)定：參考UdakaK法。在處死動(dòng)物前1小時(shí)經(jīng)

2、尾靜脈注射2％Evans蘭，在檢測(cè)前20分鐘進(jìn)行在體心臟灌注，直至心房流出清亮的液體為準(zhǔn)。術(shù)后4小時(shí)、11小時(shí)、23小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)處死小鼠，摘取腦組織用電子天平精確秤其濕重后，投人中號(hào)試管中，分別加入3ml甲酰胺，加蓋后于45℃的水浴箱孵育48h，輕輕搖勻，離心15min(3000r／min)，取上清液在722型光柵分光光度計(jì)比色(入=632nm)。5ABC—ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子的含量：術(shù)后72小時(shí)處死小鼠于冰盤(pán)上快速剝離

3、腦部組織，以冰冷的PBS沖洗，濾紙吸干，立即于電子天平秤重，配成10％腦組織勻漿，勻漿液于4℃4000r／min離心15分鐘，取上清液，采用雙抗體夾心ABC—ELISA法在波長(zhǎng)492nm處檢測(cè)IL一1B、TNFa、IL一6、IL一8、IL—lO的含量。6明膠酶譜法活力測(cè)定：取海馬區(qū)的腦組織經(jīng)勻漿離心制成蛋白質(zhì)抽提液，取20ul上樣于含5mg／ml明膠的聚丙烯酰胺凝膠中，20rnA恒流電泳，電泳后，將凝膠于25％的TritonX—100液

4、內(nèi)振蕩37℃，1小時(shí)，酶緩沖液(50mmol／1Tris，PH75；200mmol／INaCl；500mmol／1CaCl2)內(nèi)孵育37℃，42小時(shí)。孵育結(jié)束后經(jīng)染色液(005％考馬斯亮藍(lán)、30％甲醇、10％乙酸)染色3小時(shí)，及脫色液A、B、c(甲醇濃度為30％、20％、10％；乙酸濃度分別為10％、10％、5％)分別脫色O5、1、2小時(shí)顯示出MMP一2和MMP9位于藍(lán)色背景上的透亮帶。7抗氧化酶類(lèi)(GSH—PX、SOD、CAT)及NO