新型酪氨酸酶抑制劑UP302臨床前藥代動力學研究.pdf

1、UP302化學名稱為1-(2,4-二羥苯基)-3-(2,4-二甲氧基-3-甲苯)丙烷，是從桔梗蘭中提取出來的新型天然植物活性物質，是一種新型酪氨酸酶抑制劑。由于酪氨酸酶的活性與色素障礙性皮膚病、食品褐變等均有密切關系，新型酪氨酸酶抑制劑 UP302對色素障礙性皮膚病的治療、食品保鮮及農業(yè)抗蟲領域均具有重要意義。目前，研究人員正將UP302開發(fā)成一種治療色素障礙性皮膚病的新型藥物，因此對其開展揭示其 ADME（吸收、分布、代謝和排泄）速度

2、和狀況的臨床前藥代動力學（Phamacokinetics，PK）和毒代動力學（Toxicokinetics，TK）的研究是十分必要的。
　　本研究課題建立了測定大鼠血漿、皮膚、尿液、糞便以及微粒體體系中UP302的超高效液相-串聯(lián)質譜的方法，都進行了相應的方法學驗證，并成功將其應用于UP302大鼠臨床前藥代動力學研究。
　　第一，采用甲醇提取生物樣品中UP302，以大豆苷元為內標，在Hypersil Gold C18色譜柱上

3、以流動相甲醇-5 mmol·L-1甲酸銨水溶液梯度洗脫，流速0.2 mL·min-1，柱溫30℃；在電噴霧離子化電離源上以選擇反應監(jiān)測方式進行負離子檢測，用于定量分析的離子反應分別為301.1→135.2（UP302）和m/z252.9→132.0（大豆苷元）。本方法的特異性、靈敏度、檢測范圍、重現(xiàn)性、準確度和精密度均滿足藥代動力學的研究要求。
　　第二，研究了大鼠尾靜脈注射5 mg·kg-1 UP302在體內的吸收情況。大鼠尾靜

4、脈注射5 mg·kg-1 UP302，采集給藥后2，5，15，30，45 min，1，2，3，4，6 h血樣，利用LC-MS/MS測定UP302的含量，采用WinNonLin5.2.1軟件的非房室模型分析計算 UP302靜注血漿藥代動力學參數(shù)。結果表明，UP302在大鼠體內半衰期短，體內分布較廣，體內固有清除率大。
　　第三，研究了UP302乳膏透皮給藥后，在大鼠體內的吸收排泄情況。兩組剃除背部脊柱兩側毛發(fā)的大鼠在脫毛處皮膚涂上

5、UP302乳膏10 mg·cm-2（以UP302計為0.2 mg·cm-2），給藥面積為3 cm×4 cm。一組大鼠在給藥前和給藥后1，2，4，6，8，12，16，20和24 h采集血樣，并在給藥后24 h取給藥部位皮膚，另一組大鼠用于收集24 h糞便和尿液。測定大鼠給藥部位皮膚、糞便和尿液中UP302含量。血漿、皮膚和糞便中的UP302透皮分布分數(shù)分別為8.07％、0.087%和0.091%，24 h尿中未發(fā)現(xiàn) UP302。皮膚上殘留

6、的UP302乳膏量為78.96%。
　　第四，通過體內藥動學結果顯示，UP302消除半衰期很短，有很可能是肝藥酶快速代謝快所致，因此繼續(xù)開展了UP302在體外肝微粒體孵育體系中的穩(wěn)定性的研究。首先建立了大鼠肝微粒體體系的超高相液相色譜-串聯(lián)質譜檢測方法并進行了方法學驗證，其次對大鼠肝微粒體體外孵育體系的孵育時間、底物濃度、酶濃度等條件進行了摸索和優(yōu)化。其次在已優(yōu)化好的孵育時間、底物濃度、酶濃度等條件的基礎上，研究 UP302體外代

7、謝情況。確定了酶動力學參數(shù)，最大反應速度Vmax為196.08μmol·L-1·min-1·g-1，米氏常數(shù)Km為14.98μmol·L-1，內在代謝清除率CLint為13.09 mL-1·min-1·g-1。
　　第五，研究了UP302體外穩(wěn)定性情況。UP302孵育在大鼠、狗、猴和人血漿中，測定不同時間血漿中剩余 UP302百分含量，結果顯示，UP302含量百分比在四種生物血漿中均存在明顯下降，前4 h下降較快，游離UP302剩