復合抑制劑對酪氨酸酶抑制的相互作用研究.pdf

1、中藥現(xiàn)代化研究證明，不管是復方中藥還是單味中藥，基本上是以多種化學成分通過不同途徑作用于不同的生物大分子靶點，最終體現(xiàn)為整體調節(jié)的功效。在具體的藥理學研究中往往關注某一成分的作用，而忽視多個成分對生物大分子的相互作用，如多個成分對代謝途徑關鍵酶的作用。我們通過研究復合抑制劑對酪氨酸酶的相互作用，探討復合抑制劑的相互作用機理，也可為復合抑制劑在美白功效方面的應用提供理論依據(jù)。
　　酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是人體及動植物酪

2、氨酸代謝的關鍵酶。酪氨酸酶的代謝產(chǎn)物黑色素決定著人體皮膚顏色深淺，另外，酪氨酸酶也是果蔬氧化褐變及昆蟲蛻皮生化反應過程的關鍵酶。目前對于酪氨酸酶活性的抑制作用機理的研究主要集中在單一抑制劑抑制作用，在實際應用中也主要是添加酪氨酸酶抑制劑，多種酪氨酸酶抑制劑復合的應用較少。為了達到最佳的酪氨酸酶抑制效果，研究者開始嘗試復合使用多種酪氨酸酶抑制劑，但多種抑制劑間的相互作用不一定是人們所期望的協(xié)同效應，也可能是簡單相加作用甚至是拮抗效應，因此

3、開展復合酪氨酸酶抑制劑作用機理及應用研究在化妝品、醫(yī)藥、食品保鮮等方面具有重要的的現(xiàn)實意義。壬二酸，4-己基間苯二酚是目前化妝品中常用的酪氨酸酶抑制劑的美白添加成分，肉桂酸具有防腐抗菌作用，也是潛在的化妝品添加劑，常常與美白成分合用。本文以壬二酸、肉桂酸和4-己基間苯二酚這三種抑制劑為代表，開展復合抑制劑對酪氨酸酶活性抑制的相互作用研究，壬二酸又叫杜鵑花酸，天然存在于杜鵑花、當歸、黨參、黃蒿、木槿皮、白樺樹中。肉桂酸，又名β-苯丙烯酸、

4、3-苯基-2-丙烯酸，是從肉桂皮或安息香分離出的有機酸。壬二酸，4-己基間苯二酚是目前化妝品中常用的酪氨酸酶抑制劑的美白添加成分，肉桂酸具有防腐抗菌作用，也具有美白功效。三種成分及相互間合用對酪氨酸酶作用的研究內容和結果如下：
　　分別研究了壬二酸、肉桂酸和4-己基間苯二酚這三種抑制劑單獨及復合使用時對酪氨酸酶的抑制效果。Lineweaver-Burk圖形分析表明，壬二酸和4-己基間苯二酚屬于競爭性抑制劑，肉桂酸屬于非競爭性抑制劑

5、。兩種競爭性抑制劑復合（壬二酸和4-己基間苯二酚）的Lineweaver-Burk直線與單一競爭性抑制劑的圖形類似，都交于縱軸上的同一點；而非競爭性抑制劑與競爭性抑制劑復合（肉桂酸和壬二酸、肉桂酸和4-己基間苯二酚）得到的一簇直線相交于第二象限的不同坐標點。同時測定了壬二酸、4-己基間苯二酚和肉桂酸單獨及兩兩復合對酪氨酸酶活性的半抑制率濃度IC50，結果顯示三種抑制劑對酪氨酸酶抑制作用具有濃度依賴性，壬二酸、肉桂酸、4-己基間苯二酚的半

6、抑制率濃度（IC50）分別為，8.61mmol/L、0.953mmol/L、1.70μmol/L，抑制作用最強的是4-己基間苯二酚，其次為肉桂酸，三者中最弱的是壬二酸。利用效應物復合作用的等效線法和中效原理法評價了兩種抑制劑復合使用時抑制酶活性的相互作用效果，結果表明肉桂酸、壬二酸、4-己基間苯二酚兩兩復合可產(chǎn)生相互協(xié)同增效的酶活性抑制效應。
　　小鼠B16黑色素瘤細胞培養(yǎng)應用于黑色素生成抑制劑的篩選以及細胞毒性的研究，為黑色素生

7、成抑制劑的篩選提供了一種快捷途徑，有望發(fā)展成為高通量篩選方法。實驗研究了三種抑制劑單獨及復合情況下對小鼠B16黑素瘤細胞抑制效果及對酪氨酸酶活力的影響，采用CDI和Q值方法評價，發(fā)現(xiàn)在實驗中所采用的抑制劑濃度下進行復合，抑制劑間存在相互作用，但不同的評價方法得出的相互作用效應的結論可能不一致。
　　以灰度為指標分別探討了壬二酸、肉桂酸、4-己基間苯二酚在抑制山藥切片褐變中的效果，實驗結果說明三種酪氨酸酶抑制劑都具有一定程度的抑制山

8、藥切片褐變的作用，抑制劑復合使用比單獨使用抑制褐變效果增加，但未見明顯的協(xié)同增效作用。
　　分別研究了通過熒光光譜法研究分析酶與抑制劑結合后的熒光光譜變化。結果表明，壬二酸和肉桂酸的Stern-Volmer曲線圖均有明顯的線性關系，變溫實驗結果顯示肉桂酸對酪氨酸酶的熒光猝滅作用表現(xiàn)為靜態(tài)猝滅作用，壬二酸的猝滅作用為動態(tài)猝滅。肉桂酸與酪氨酸酶的結合能力大于壬二酸，這可能是肉桂酸對酪氨酸酶活性抑制強于壬二酸的原因之一。在壬二酸存在的條