中國兒童期重癥肌無力臨床免疫特點(diǎn)及發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、第一部分中國兒童期重癥肌無力臨床免疫特點(diǎn)研究
　　目的：通過回顧性和前瞻性研究，總結(jié)歸納中國兒童期重癥肌無力的臨床及免疫學(xué)特點(diǎn)。
　　方法：本研究首先采用回顧性研究方法，回顧分析了在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)院門診就診的4219名重癥肌無力患者的臨床資料（1982年1月至2010年7月），對病人的性別、發(fā)病年齡、臨床分型、胸腺及甲狀腺功能情況等進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。隨后，我們隨機(jī)選擇104名兒童期重癥肌無力患者和100名健康對照進(jìn)行了前瞻

2、性研究（2011年1月至2013年6月在我科門診就診）。隨訪主要是通過在門診就診過程中的評估、家庭走訪、電話跟蹤和病歷回顧完成。臨床分級主要通過Osserman分級來進(jìn)行。臨床癥狀及療效評判時(shí)間點(diǎn)分別為首診、治療后2周、4周、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月和最后一次就診，通過美國重癥肌無力協(xié)會重癥肌無力評價(jià)量表（Myasthenia Gravis Foundation of America Quantitative MG scale，Q-MG

3、，0-39分）、Osserman量表、日?；顒恿勘恚ˋctivities of daily living scoring system，MG-ADL，24分）以及肌力量表（Manual muscle testing，MMT）來評價(jià)。相關(guān)輔助檢查，如胸部MRI/CT平掃、甲狀腺功能檢測（FT3、FT4、TSH）、及免疫全套（IgG、IgA、IgM，C3、C4）等于首次就診時(shí)在同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科進(jìn)行，有條件的患者在之后隨訪中也按需進(jìn)行。采集了患

4、者及對照組兒童的外周血，利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測外周血血清中乙酰膽堿受體抗體（AChRAb）水平，利用定量抗體芯片技術(shù)對血清中IgG亞型進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：回顧性研究發(fā)現(xiàn)51.22％的重癥肌無力患者在兒童期發(fā)病。前瞻性研究中，兒童期重癥肌無力患兒的AChRAb陽性率為69.2%。與正常對照相比，兒童期重癥肌無力患兒血清IgG，IgA，IgM，C3及C4水平均有顯著性降低（P<0.05）；IgG亞型分析中，IgG1和

5、IgG3水平高于對照組（P<0.05），其余亞型無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。與免疫抑制治療前相比較，Q-MG量表及Osserman量表評分在治療后3、6、12個(gè)月及最后一次隨訪時(shí)均有明顯改善（P<0.05）；MG-ADL量表評分在治療后3、6、12個(gè)月也有顯著下降（P<0.05）；MMT量表在治療后6個(gè)月和12個(gè)月有明顯改善（P<0.05）。
　　結(jié)論：我們的研究結(jié)果表明，中國兒童期重癥肌無力在全部重癥肌無力中所占的比例較其他國

6、家及地區(qū)明顯高，本研究中發(fā)現(xiàn)中國兒童期重癥肌無力患者AChRAb陽性率高，免疫球蛋白及補(bǔ)體異常，免疫抑制劑治療有效，提示其為自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的自身免疫性疾病。
　　第二部分中國兒童期重癥肌無力發(fā)病機(jī)制探討
　　目的：通過前瞻性研究，對中國兒童期重癥肌無力的可能發(fā)病機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法：本研究中，我們隨機(jī)選取了104名兒童期重癥肌無力患者和100名健康對照進(jìn)行了前瞻性研究（于2011年1月至2013年6月在同濟(jì)醫(yī)院神

7、經(jīng)內(nèi)科門診就診）。采集了患者及對照組兒童的外周血，送往同濟(jì)醫(yī)院兒科病毒實(shí)驗(yàn)室，檢測外周血病毒感染全套(抗巨細(xì)胞病毒/風(fēng)疹病毒/弓形蟲/單純皰疹病毒I/單純皰疹病毒II-IgM/IgG以及抗埃可病毒/細(xì)小病毒19/EB病毒/柯薩基病毒-IgM的含量)和常見呼吸道感染病原體（Q立克次體/肺炎衣原體/呼吸道合胞病毒/流感病毒A/流感病毒B/副流感病毒）的IgM抗體含量；利用ELISA方法檢測外周血血清中IL-17A，IL-23以及IL-12/

8、23p40的表達(dá)水平；利用iTRAQ蛋白組學(xué)技術(shù)篩選兩組之間的免疫相關(guān)差異蛋白，并通過ELISA的方法對篩選出的差異蛋白進(jìn)行進(jìn)一步確定。同時(shí)，我們還在病理科搜取了行胸腺切除術(shù)重癥肌無力患兒的胸腺石蠟標(biāo)本作為病例組，取進(jìn)行校正性心血管手術(shù)的非重癥肌無力患兒胸腺標(biāo)本作為正常對照組，進(jìn)行HE染色，CD20及CD21免疫組織化學(xué)染色。
　　結(jié)果：前瞻性研究中，與正常對照組相比，重癥肌無力患兒組的外周血病毒感染全套中各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異（

9、P>0.05）；重癥肌無力患兒外周血血清中IL-17A，IL-23以及IL-12/23p40的表達(dá)水平較對照組均明顯升高（P<0.05）；通過兩次iTRAQ蛋白組學(xué)檢測（初篩檢測和確認(rèn)檢測），篩選出血清免疫學(xué)相關(guān)差異蛋白Properdin，其在重癥肌無力患兒組的含量顯著高于正常對照組（P<0.05），隨后我們?yōu)榱诉M(jìn)一步確認(rèn)其可靠性，進(jìn)行了外周血血清Properdin ELISA驗(yàn)證，與健康對照相比，中國兒童重癥肌無力患兒血清中Prope

10、rdin含量明顯高于健康對照（P<0.05），與iTRAQ蛋白組學(xué)結(jié)果一致。胸腺免疫組織化學(xué)染色所見：與正常對照相比，重癥肌無力患兒的胸腺并未表現(xiàn)出明顯的增生。但是，重癥肌無力患兒胸腺可觀察到明顯CD20+CD21+染色反應(yīng)。
　　結(jié)論：本研究中，重癥肌無力患兒外周血IL-17A，IL-23以及IL-12/23p40的水平升高；重癥肌無力患兒胸腺免疫組織化學(xué)染色可觀察到明顯B細(xì)胞活化，聚集成生發(fā)中心；重癥肌無力患兒外周血Prope