SMYD3提高雄激素受體表達(dá)促進(jìn)前列腺癌發(fā)生的機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　 雄激素受體(androgenreceptor，AR)在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵性的作用，并且多數(shù)呈過(guò)表達(dá)狀態(tài)。雄激素-雄激素受體通路是正常前列腺腺體增長(zhǎng)和前列腺癌發(fā)生的重要信號(hào)通路。當(dāng)AR與雄激素結(jié)合并被激活后，AR磷酸化并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)。在細(xì)胞核內(nèi)，AR結(jié)合到染色質(zhì)上相應(yīng)的結(jié)合區(qū)域并激活靶基因的轉(zhuǎn)錄，這是前列腺發(fā)育和前列腺癌進(jìn)展的重要環(huán)節(jié)。然而，很少有研究涉及到AR表達(dá)的表遺傳學(xué)調(diào)節(jié)。
　　 近期研究

2、證明表遺傳學(xué)在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用，其中包括組蛋白修飾酶介導(dǎo)的AR信號(hào)通路作用，SMYD3(SETandMYNDdomain-containingprotein3)是新近發(fā)現(xiàn)的組蛋白甲基化酶，其識(shí)別并結(jié)合下游靶基因啟動(dòng)子的特異性序列(CCCTCC)，引起組蛋白H3-K4雙甲基化/三甲基化，從而導(dǎo)致靶基因的轉(zhuǎn)錄功能。盡管SMYD3在人體正常組織中表達(dá)較弱或呈不表達(dá)狀態(tài)，然而其在多數(shù)結(jié)腸癌、肝癌和乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中呈過(guò)表達(dá)

3、狀態(tài)，并起到至關(guān)重要的作用。
　　 目的:
　　 研究組蛋白甲基化酶SMYD3在調(diào)節(jié)AR表達(dá)中的作用以及其對(duì)前列腺癌腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的影響。
　　 方法:
　　 收集臨床患者前列腺癌組織標(biāo)本，通過(guò)蛋白印跡實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)確定前列腺癌中SMYD3的表達(dá)情況。然后，在前列腺癌細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染可以抑制SMYD3表達(dá)的shRNA或者siRNA，并通過(guò)細(xì)胞周期分析、細(xì)胞克隆形成分析、體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)分析這種現(xiàn)象

4、。此外，通過(guò)相應(yīng)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（實(shí)時(shí)定量PCR、免疫印跡和熒光報(bào)告分析等實(shí)驗(yàn)）測(cè)試AR的表達(dá)和啟動(dòng)子功能。并且通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)評(píng)估AR啟動(dòng)子與Sp1、SMYD3和組蛋白修飾的結(jié)合情況。
　　 結(jié)果:
　　 收集到8例患者成對(duì)的新鮮組織標(biāo)本，經(jīng)免疫印跡實(shí)驗(yàn)分析，與癌旁組織相比，腫瘤組織中7例檢測(cè)到表達(dá)上調(diào)的SMYD3蛋白。25例前列腺癌切片標(biāo)本中，經(jīng)免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，8例SMYD3細(xì)胞核強(qiáng)染色，23例細(xì)胞質(zhì)染色，良性前

5、列腺組織中僅表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)局部區(qū)域的弱染色。轉(zhuǎn)染shRNA或者siRNA敲除SMYD3后，前列腺癌細(xì)胞系的增值、克隆形成、細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和異體腫瘤形成均受到影響。在AR啟動(dòng)子區(qū)域檢測(cè)到2個(gè)SMYD3功能性結(jié)合區(qū)域，可以直接激活A(yù)R基因的轉(zhuǎn)錄。SMYD3在AR啟動(dòng)子區(qū)域誘導(dǎo)染色質(zhì)重構(gòu)，緊接著Sp1結(jié)合到此區(qū)域，兩者的結(jié)合共同上調(diào)AR的表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1.SMYD3在前列腺癌中表達(dá)水平上調(diào);2.SMYD3沉默可以明顯