miR-leT-7a在大白豬甲狀腺中的表達(dá)及其細(xì)胞凋亡影響的初步研究.pdf

1、microRNA（miRNA）是一類內(nèi)源性的非編碼RNA，廣泛參與細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、分化、增殖和凋亡等生物學(xué)過(guò)程。miR-let-7是一種miRNA，而miR-let-7a是miR-let-7家族的重要成員，對(duì)細(xì)胞的增殖與凋亡的調(diào)控有著重要的作用。
　　為了研究miR-let-7a對(duì)豬(Sus scrofa)甲狀腺的生長(zhǎng)發(fā)育及其細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用，本研究利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)了miR-let-7a在不同生長(zhǎng)階段

2、（胚齡60、80、105d和日齡25、60、90、120、150、180d）大白豬甲狀腺組織中的表達(dá)量變化;利用間接免疫熒光技術(shù)對(duì)甲狀腺組織中特異性表達(dá)的甲狀腺球蛋白(TG)進(jìn)行檢測(cè)，從而鑒定了大白豬的甲狀腺組織;通過(guò)組織塊消化培養(yǎng)法對(duì)甲狀腺細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察了原代和傳代甲狀腺細(xì)胞的基本形態(tài)，采用間接免疫熒光法鑒定了其是否為大白豬甲狀腺細(xì)胞和具有正常的功能;通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-let-7a mimics，并利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了轉(zhuǎn)染組與未

3、轉(zhuǎn)染組的甲狀腺細(xì)胞凋亡率，進(jìn)而利用生物信息學(xué)手段預(yù)測(cè)了miR-let-7a與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的靶向關(guān)系，用以分析miR-let-7a調(diào)控細(xì)胞凋亡的相關(guān)路徑。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲狀腺組織和細(xì)胞中的甲狀腺球蛋白(TG)發(fā)出明顯的綠色熒光，表明體外培養(yǎng)的甲狀腺細(xì)胞功能正常。qRT-PCR結(jié)果顯示，胚胎期隨著胚齡的增加，miR-let-7a的相對(duì)表達(dá)量逐漸增加。出生后miR-let-7a表達(dá)量下降，于60日齡達(dá)生長(zhǎng)期最小值，之后有所上升，至

4、90日齡后其表達(dá)量再次下降，120日齡后隨日齡的增加，miR-let-7a表達(dá)量呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)。凋亡結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率明顯升高(P＜0.05)。根據(jù)研究結(jié)果推測(cè)，miR-let-7a的表達(dá)直接或間接影響了甲狀腺細(xì)胞凋亡的調(diào)控過(guò)程。通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)得到了大量miR-let-7a的候選靶基因，KEGG通路分析得到了這些靶基因顯著富集的16個(gè)通路以及與細(xì)胞凋亡通路中的兩個(gè)候選靶基因FAS和FASL，推測(cè)在甲狀腺