MicroRNA let-7c在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)、功能及靶點(diǎn)研究.pdf

1、目的：
　　 檢測(cè)microRNAlet-7c(miR-let-7c)在肝細(xì)胞癌組織及肝癌細(xì)胞株的表達(dá)，分析miR-let-7c表達(dá)量同肝癌臨床病理因素之間的相關(guān)性；通過(guò)上調(diào)miR-let-7c表達(dá)，檢測(cè)肝癌細(xì)胞增殖、周期和細(xì)胞凋亡所發(fā)生的改變；對(duì)miR-let-7c的靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，分析并初步驗(yàn)證，為肝細(xì)胞肝癌的靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)32例肝癌組織及其配對(duì)癌旁組

2、織、6種肝癌細(xì)胞株中miR-let-7c的表達(dá)情況，分析miR-let-7c的表達(dá)量同肝癌臨床病理特征之間的相關(guān)性；肝癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-let-7cAgomir使其過(guò)表達(dá)miR-let-7c，通過(guò)細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒CCK-8檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-let-7c對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響；流式細(xì)胞儀檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-let-7c對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響；應(yīng)用生物學(xué)信息方法如miRBase、PicTar以及TargetScan三大數(shù)據(jù)庫(kù)，預(yù)測(cè)miR-l

3、et-7c的作用靶點(diǎn)，再通過(guò)定量PCR、WesternBlot以及Luciferase熒光素酶靶點(diǎn)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證miR-let-7c的作用靶點(diǎn)，從而闡明miR-let-7c在肝癌的發(fā)生發(fā)展中，類(lèi)似于抑癌基因的分子作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 miR-let-7c在肝癌組織、肝癌細(xì)胞株中低表達(dá)，肝癌組織中miR-let-7c表達(dá)量低于其癌旁組織者有28例，表達(dá)量高于其癌旁組織者4例，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；6種肝

4、癌細(xì)胞中miR-let-7c表達(dá)量均低于L-02正常肝細(xì)胞(P<0.01)，且高轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株MHCC-97H中miR-let-7c的表達(dá)量低于低轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞MHCC-97L(P<0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；miR-let-7c的表達(dá)量同肝癌分化程度相關(guān)(P<0.01)。CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)miR-let-7c抑制HepG2和SMCC-7721細(xì)胞的增殖(P<0.01)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)miR-l

5、et-7c促進(jìn)HepG2細(xì)胞的凋亡和阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程。(P<0.01)。miR-let-7c靶基因成功預(yù)測(cè)；通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-let-7c上調(diào)miR-let-7c的表達(dá)水平后，其靶基因CDC25A在mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯的變化；但其CDC25A蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.01)。通過(guò)過(guò)表達(dá)miR-let-7c表達(dá)水平后，相對(duì)于對(duì)照組pmiR-CDC25A-3'UTR-mut1以及pmiR-CDC25A-3’-UTR-mut2的熒光素酶l

6、uciferase的活性，pmiR-CDC25A-3’-UTR-wt的熒光素酶luciferase的活性明顯受到抑制(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.miR-let-7c在肝癌組織和細(xì)胞中低表達(dá)，其表達(dá)量與肝癌分化程度相關(guān)。
　　 2.過(guò)表達(dá)miR-let-7c具有抑制肝癌細(xì)胞的增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡和阻滯細(xì)胞周期的作用。
　　 3.miR-let-7c抑制肝癌細(xì)胞增殖通過(guò)靶向抑制CDC25A靶基因