SPOCK1基因對膀胱癌細胞侵襲和增殖的影響_3529.pdf

1、背景：
　　在我國泌尿系統(tǒng)中，膀胱癌發(fā)病率和死亡率逐年上升，是最常見的惡性腫瘤?，F如今經尿道膀胱腫瘤電切術以及根治性膀胱切除+尿流改道手術，術后輔以放、化療等仍然是膀胱癌治療的最重要、最有效的方法。但是即使經過手術，輔助放化療，部分膀胱癌治療效果依舊不理想，究其原因歸結于膀胱癌的復發(fā)和轉移。膀胱癌的復發(fā)和轉移是導致患者死亡和治療失敗的主要原因，當前對膀胱癌發(fā)生發(fā)展的機制尚未十分清楚，故有必要研究其發(fā)病機制，尋找有效的治療靶點。SP

2、OCK1(Sparc/osteonectin cwcv and kazal-like domains proteoglycan1)基因編碼的細胞外基質糖蛋白，被證實與多種腫瘤細胞的增殖、黏附及轉移密切相關。在腫瘤細胞中SPOCK1基因過表達能夠促進腫瘤細胞侵襲轉移；反之，沉默SPOCK1的表達可使腫瘤細胞喪失其轉移能力。在膀胱癌組織中，已發(fā)現SPOCK1基因存在高表達，并且SPOCK1高表達與尿路上皮癌預后差有關。通過在膀胱癌細胞中降低

3、SPOCK1基因，觀察其侵襲和增殖的改變，了解SPOCK1基因對膀胱癌發(fā)生發(fā)展的影響，從而為膀胱癌機制研究提供實驗理論依據。
　　目的：
　　1、驗證在膀胱癌細胞中SPOCK1基因的表達情況。
　　2、通過體外細胞實驗進一步研究SPOCK1基因對膀胱癌細胞侵襲和增殖的影響。
　　方法：
　　1、qRT-PCR和 Western Blot方法檢測人輸尿管上皮永生化細胞（SV-HUC-1），膀胱癌細胞株5637

4、以及膀胱癌細胞株T24中目的基因SPOCK1的表達情況。
　　2、構建SPOCK1小干擾RNA片段（siRNA），采用脂質體介導轉染至膀胱癌細胞株5637中。我們將實驗分組為空白對照組（Control cells group）、無義序列組（Scrambled siRNA group）和實驗組（SPOCK1 siRNA group）。通過qRT-PCR檢測各組SPOCK1mRNA相對表達量情況，Western Blot方法檢測轉染后

5、SPOCK1蛋白的變化，篩選最佳干擾序列。
　　3、使用RNAi技術下調膀胱癌細胞株5637中SPOCK1基因的表達，分別使用劃痕實驗，Transwell法和CCK-8法檢測降低SPOCK1基因的表達后膀胱癌細胞侵襲和增殖能力的改變情況。
　　結果：
　　1、qRT-PCR和Western Blot方法檢測結果表明，SPOCK1基因相關mRNA和蛋白在膀胱癌細胞系中存在過表達現象，并且在膀胱癌細胞株5637中表達較膀胱

6、癌細胞株T24更高。
　　2、同其它的干擾序列相比，SPOCK1-siRNA-2序列干擾效果最好（P＜0.05）。
　　3、使用RNAi技術下調膀胱癌細胞株5637中SPOCK1基因表達,通過劃痕實驗，Transwell法和CCK-8法檢測發(fā)現膀胱癌細胞侵襲和增殖能力明顯受到抑制。
　　結論：
　　1、SPOCK1基因在膀胱癌細胞中存在高表達。
　　2、SPOCK1基因的高表達促進了膀胱癌細胞的侵襲和增殖能