厄貝沙坦對單側(cè)輸尿管梗阻小鼠腎臟CTGF、ILK表達的影響及意義探討.pdf

1、目的：腎小管間質(zhì)纖維化(tubulointerstitial fibrosis，TIF)是終末期腎病的重要病理特征，并與慢性腎病預(yù)后密切相關(guān)。最近研究表明腎小管上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)是腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展的重要機制。腎臟局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)激活在慢性腎臟疾病的進展中起十分重要的作用。血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)作為其中最為重要的效應(yīng)物質(zhì)，不僅通過受

2、體1途徑調(diào)節(jié)腎單位血流動力學(xué)，而且對腎臟固有細胞增殖、分化、胞外基質(zhì)重塑有重要的影響，但是其作用機制仍是國內(nèi)外研究的熱點。本研究通過單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)模型觀察AngⅡ 1型受體拮抗劑厄貝沙坦(Irbesartan，Irb)對腎組織結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)和整合素連接激酶(integrin-linked kinase，ILK)表達的影響，并探討其與腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)

3、化的關(guān)系。 方法：將清潔級、健康雄性CD-1小鼠(10周齡、18-22克)隨機分為三大組，假手術(shù)組(c，N=20)、單側(cè)輸尿管結(jié)扎組(UUO，N=40)和Irbesartan干預(yù)組(UUO+Irb，N=40)。分別在手術(shù)后1，3，7，14天處死小鼠，留取標本。測定血清肌酐值評估小鼠腎功能。Masson染色觀察腎組織基本結(jié)構(gòu)及間質(zhì)纖維化程度。免疫組化檢測小鼠腎組織CTGF、ILK、上皮細胞鈣粘蛋白(E-cadherin)和α平滑肌

4、肌動蛋白(α-SMA)表達，Western印跡觀察小鼠腎組織CTGF、ILK蛋白表達，熒光實時定量RT-PCR(real-time RT-PCR)檢測CrGF、ILK、E-cadherin、α-SMA和纖維連接素(Fibronectin，F(xiàn)N)mRNA表達。 結(jié)果：UUO組術(shù)后7天腎間質(zhì)纖維化形成[(19.73±1.67)﹪VS.(2.00±0.33)﹪，P<0.01]；14天纖維化面積進一步擴大[(32.60±1.83)﹪VS

5、．(1.48±0.58)﹪，P<0.01]。與UUO組相比，Irb治療組腎小管間質(zhì)損傷程度明顯減輕[7天(15.11±1.37)﹪；14天(28.46±1.07)﹪]。與假手術(shù)組相比，UUO組術(shù)后1天起CTGF和ILK mRNA及蛋白表達均增高，Irb治療組CTGF和ILK表達均被顯著抑制(P分別<0.01)。術(shù)后3天，UUO組E-cadherin mRNA及蛋白表達較對照組明顯減少，而Irb治療組E-cadherin表達較UUO組增高

6、(P<0.01)：同時α-SMA mRNA及蛋白表達顯著增加，Irb治療組顯著抑制其表達(P<0.01)；UUO組FN mRNA表達于術(shù)后3天較對照組顯著增加，Irb治療組FN表達較UUO組顯著減少(P<0.01)。Western Blot結(jié)果顯示，術(shù)后1-7天，ILK蛋白表達與CTGF蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.97，P<0.01)；根據(jù)免疫組化結(jié)果，術(shù)后1-14天，CTGF蛋白表達與α-SMA蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.87，P<0.0

7、1)，與E．cadherin蛋白表達呈負相關(guān)(r=-0.94，P<0.01)；術(shù)后1-7天，ILK蛋白表達與α-SMA蛋白表達呈正相關(guān)(r=-0.88，P<0.01)，與E-cadherin蛋白表達呈負相關(guān)(r=-0.87，P<0.01)。 結(jié)論： 1．在單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)腎間質(zhì)纖維化形成過程中，腎小管上皮細胞發(fā)生了上皮一間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。 2．在UUO模型早期，腎小管上皮細胞表達CTGF和ILK增多，且與腎小管