華蟾素注射液對前列腺癌PC3細(xì)胞增殖抑制及VEGF-KDR表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討華蟾素注射液對前列腺癌 PC3細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲能力及VEGF/KDR mRNA及蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)前列腺癌PC3細(xì)胞株,采用MTT(四甲基偶氮唑藍(lán))法檢測不同濃度華蟾素注射液(0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l)對前列腺癌PC3細(xì)胞增殖的影響,同時設(shè)立空白對照組。(2)FCM法分析該藥對PC3細(xì)胞周期分布的影響。(3)DNA Ladder檢測細(xì)胞凋亡情況。(4)

2、細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測藥物對PC3細(xì)胞的遷移能力的影響。(5)RT-PCR法檢測經(jīng)藥物處理PC3細(xì)胞后對VEGF/KDRmRNA表達(dá)水平的影響。(6)蛋白印跡法檢測藥物處理PC3細(xì)胞后,細(xì)胞中VEGF及KDR蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:(1)MTT法檢測結(jié)果顯示,不同濃度華蟾素注射液(0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l)能有效抑制前列腺癌PC3細(xì)胞的增殖作用,隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長,藥物的作

3、用效果明顯增加,并對其生長抑制率進(jìn)行組間和組內(nèi)統(tǒng)計學(xué)分析,均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),表明華蟾素對PC3細(xì)胞的抑制作用具有一定的濃度和時間依賴性。(2)FCM法檢測PC3細(xì)胞分布比例可見用華蟾素注射液作用后,G1/G0期細(xì)胞比例顯著減少,S期細(xì)胞比例顯著增加,而G2/M期細(xì)胞比例變化不大,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析P<0.05。表明Cino能將PC3細(xì)胞阻滯在S期從而抑制細(xì)胞的增殖。(3)DNA凝膠電泳法檢測到藥物處理后出現(xiàn)明顯的梯度條帶,DN

4、A出現(xiàn)不同程度的降解,表明Cino抑制細(xì)胞生長在一定程度上是通過誘導(dǎo)凋亡來實(shí)現(xiàn)的。(4)細(xì)胞劃痕試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)華蟾素注射液具有一定抑制PC3細(xì)胞遷移的能力及抑制細(xì)胞生長的作用。(5)RT-PCR法檢測結(jié)果顯示華蟾素注射液降低VEGF/KDR RNA表達(dá)水平從而起到抑制作用,且根據(jù)灰度分析得到隨著藥物濃度增高其表達(dá)水平逐漸降低。(6)蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示,不同濃度華蟾素注射液(2.5、5、10mg/l)處理PC3細(xì)胞48h后,隨著藥物濃度的

5、增加VEGF和KDR蛋白表達(dá)量逐漸降低,具有一定的濃度依賴性。
　　結(jié)論:華蟾素注射液可以抑制前列腺癌PC3細(xì)胞的生長,并呈一定的時間-劑量依賴性關(guān)系,測得IC50約為6.5mg/l,最佳作用時間為48h;華蟾素注射液對前列腺癌PC3細(xì)胞有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用,并能使腫瘤細(xì)胞阻滯于S期;華蟾素注射液在一定程度上可以抑制前列腺癌PC3細(xì)胞的遷移能力;華蟾素注射液可以明顯降低VEGF及KDR蛋白及mRNA的表達(dá)水平,從而抑制腫瘤細(xì)胞的生