KDR在人前列腺癌的表達及KDR反義寡核苷酸對PC-3細胞作用的研究.pdf

1、目的:前列腺癌(prostatic cancer,Pea)是歐美男性人群中發(fā)病率、死亡率很高的疾病。近年來，該疾病的發(fā)病率在亞洲國家也有上升趨勢。雖然治療PCa的方法較多，但臨床上尚缺乏治療雄激素非依賴勝前列腺癌的有效方法，因此如何誘導雄激素非依賴性前列腺癌細胞凋亡、抑制腫瘤生長成為該領域研究的熱點。許多研究發(fā)現(xiàn)血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在多種腫瘤組織高表達，與腫瘤

2、的發(fā)生、發(fā)展密切相關，VEGF與其特異的激酶插入?yún)^(qū)受體(kinase insert domain-containing receptor,KDR)結合后發(fā)揮生物學效應，在腫瘤起始和充分發(fā)展階段介導腫瘤細胞增殖和血管生成。已有一些研究表明，VEGF廣泛表達于前列腺癌細胞和間質細胞，與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展有一定的關系，但目前有關KDR與PCa關系的研究尚不多。因此，本研究觀察了KDR在臨床PCa組織及PCa三株細胞的表達隋況，并以良性前列腺

3、增生(benignprostatic hypertrophy，BPH)組織作對照，然后對高表達KDR基因的PC-3細胞轉染不同濃度的KDR反義寡核苷酸(antiscnse oligodeoxyribonucleotides，ASODN)，檢測ASODN對KDR表達的影響，以及對PC-3細胞生長、細胞周期和凋亡的作用。 方法:1．收集48例PCa和20例BPH組織標本，運用免疫組織化學技術分析KDR的表達，比較KDR在PCa和BP

4、H組織中表達的差異。2．培養(yǎng)LNCap、DU-145和PC-3三株前列腺癌細胞。運用熒光定量PCR技術分析KDR在三株細胞的表達情況，并分析其在三株細胞表達的差異。3．在表達KDR最強的PC-3細胞中，轉染不同濃度KDR ASODN，運用MTT法檢測不同干擾濃度下PC-3細胞的生長隋況；用熒光定量PCR技術檢測KDR的表達；運用流式細胞術檢測PC-3細胞周期的變化及細胞凋亡情況。分析不同濃度KDRASODN對PC-3細胞生長、KDRmR

5、NA表達、細胞周期以及細胞凋亡的影響。 結果:1.KDR在PCa和BPH組織表達的免疫組織化學結果為：①KDR在PCa和BPH組織中均有表達，但在PCa組織中表達的強度和密度均較BPH組織強。②KDR在中分化和低分化PCa組織表達強度的陽性率有差異，但無統(tǒng)計學意義。③KDR在PCa細胞及間質內皮細胞均有表達。2．實時熒光定量PCR檢測結果顯示，三株PCa細胞中KDR在PC-3細胞的表達最強，其次是DU-145細胞，在LNCap細

6、胞表達最弱。3．KDR ASODN轉染PC-3細胞后48小時細胞增殖抑制達最高峰，且抑制率與ASODN濃度相關。正義寡核苷酸(Sense oligodeoxynucleotide，SODN)和陽離子脂質體(Lipofectamine 2000，L2000)對PC-3細胞的生長無明顯抑制作用。不同濃度ASODN干擾后使PC-3細胞中KDR mRNA的表達出現(xiàn)不同程度的下降。流式細胞術顯示細胞周期未發(fā)生改變，但各濃度組均出現(xiàn)不同程度細胞凋亡

7、，凋亡率最高達48.6％。 結論:1．KDR在PCa和BPH組織中均有表達，PCa組織中的表達強于BPH組織中的表達；在中分化和低分化PCa組織的陽性表達率有差別，但沒有統(tǒng)計學意義，有待進一步研究。2．KDR在激素非依賴性前列腺癌細胞株的表達強于其在激素依賴性細胞株的表達，在PC-3細胞中表達最強。3．用不同濃度KDR ASODN轉染PC-3細胞后48小時達增殖抑制高峰，細胞中KDRmRNA的表達有不同程度的下調，引起不同程度的