Survivin基因?qū)η傲邢侔㏄C-3細胞MicroRNA表達的影響.pdf

1、第一部分：
　　 目的:運用RNAi技術(shù)抑制前列腺癌PC-3細胞中survivin的表達,檢測survivin抑制對PC-3細胞的影響。
　　 方法:構(gòu)建負載survivin短發(fā)夾RNA(shRNA)的重組腺病毒(pGSadcno-surshRNA),體外轉(zhuǎn)染PC-3細胞。MTT法檢測細胞增殖活性,流式細胞術(shù)(FCM)檢測凋亡率,RT-PCR和western blot分別檢測survivin mRNA及蛋白表達。

2、　　 結(jié)果:負載survivin shRNA重組腺病毒構(gòu)建成功；實驗組與對照組相比在不同的時間點survivin基因的表達均受到不同程度的抑制,表現(xiàn)為細胞增殖活性下降,凋亡增加,survivin mRNA及其蛋白表達降低。至轉(zhuǎn)染96h后survivin基因抑制最明顯,survivin mRNA及其蛋白的表達強度分別降低了(72.23±1.11)％和(71.75±2.64)％,細胞凋亡率達到(14.43±0.57)％,與陰性對照組及空白

3、對照組相比差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論:腺病毒載體介導的survivin shRNA可有效地抑制PC-3細胞中survivin的表達,RNAi結(jié)合腺病毒載體抑制survivin表達有望成為雄激素非依賴前列腺癌的基因治療方法之一。
　　 第二部分：
　　 目的:運用microRNA芯片檢測survivin抑制后前列腺癌PC-3細胞中microRNAs表達譜的變化,并預測survivin與相關(guān)m

4、iRNAs之間的關(guān)系。
　　 方法:利用負載survivin短發(fā)夾RNA(shRNA)重組腺病毒(pGSadeno-surshRNA),體外轉(zhuǎn)染PC-3細胞96h后,收集細胞提取RNA,microRNA芯片檢測miRNAs表達譜變化。
　　 結(jié)果:共有650個miRNAs表達信號在雄激素非依賴前列腺癌PC-3細胞中可以被檢測到,有9個miRNAs的表達信號水平高于1000；實驗組與空白對照組相比有75個miRNAs表達具