白藜蘆醇對3T3-L1前脂肪細(xì)胞成脂分化以及TNF-α誘導(dǎo)的脂肪因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：(1)觀察白藜蘆醇對3T3-L1前脂肪細(xì)胞成脂分化的影響；(2)探討白藜蘆醇對腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)的脂肪因子表達(dá)的影響及其機(jī)制。 方法：(1)通過CCK-8法檢測Sirtl激動劑-白藜蘆醇對3T3-L1細(xì)胞增殖活力影響，油紅O染色法、甘油三酯GPO-POD酶法測定白藜蘆醇對3T3-L1細(xì)胞脂肪含量增長的影響情況，借助于甘油含量測定試劑盒檢測3T3-L1脂肪細(xì)胞脂質(zhì)分解的情況；(2)分別以不同濃度白藜蘆醇、核因

2、子-κB(NF-κB)的抑制劑-BAYll-7082或Sirtl抑制劑-Sirtinol和TNF-α共同處理成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞，用定量PCR技術(shù)、ELISA技術(shù)檢測各條件下白介素-6(IL-6)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)以及脂聯(lián)素基因轉(zhuǎn)錄、蛋白分泌情況；(3)分別以不同濃度白藜蘆醇或Sirtinol和TNF-α共同處理轉(zhuǎn)染含IL-6、MCP-1啟動子的熒光素酶報告質(zhì)粒的HEK293細(xì)胞，通過熒光素酶基因報告技術(shù)檢測各組的

3、熒光素酶活性；(4)TNF-α(10ng/ml)處理表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA-Sirtl或pCMV-IκBa)與熒光素酶報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞，通過熒光素酶報告技術(shù)檢測各組的熒光素酶活性；(5)以不同濃度白藜蘆醇和TNF-α共同處理成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞1h，通過凝膠電泳遷移率檢測(EMSA)技術(shù)檢測各組細(xì)胞核NF-κB的DNA結(jié)合能力；(6)TNF-α(10ng/ml)處理分別轉(zhuǎn)染pcDNA-Sirt1或pcDNA3.1/my

4、c-His B的HEK293細(xì)胞，通過EMSA技術(shù)檢測各組NF-κB的DNA結(jié)合能力。 結(jié)果：(1)白藜蘆醇(0～100μM)以劑量、時間依賴方式抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的生長，當(dāng)濃度>50μM時，白藜蘆醇引起分化中期及分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞的活力下降；此外，白藜蘆醇以劑量依賴方式阻止細(xì)胞分化過程中細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量聚積，但對脂肪分解無明顯影響；(2)白藜蘆醇以劑量依賴的方式減弱TNF-αc對3T3-L1脂肪細(xì)胞IL-6

5、、MCP-1以及脂聯(lián)素的基因轉(zhuǎn)錄、蛋白分泌的影響；BAY11-7082阻止、而Sirtinol增強(qiáng)TNF-α對IL-6、MCP-1基因轉(zhuǎn)錄的上調(diào)作用；(3)白藜蘆醇減弱、而Sirtinol增強(qiáng)TNF-α誘導(dǎo)的IL-6、MCP-1啟動子活性；(4)過表達(dá)NF-κB抑制蛋白α(IκBα)可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的IL-6、MCP-1啟動子的轉(zhuǎn)錄活性；(5)過表達(dá)Sirt1可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB依賴的轉(zhuǎn)錄活性，但不影響NF-KB的D