血管緊張素Ⅱ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖及分化影響的研究.pdf

1、脂肪細(xì)胞的過度肥大和增殖是導(dǎo)致肥胖的主要原因，研究前脂肪細(xì)胞的增殖及分化有助于深入了解脂肪組織發(fā)育的生理學(xué)和病理生理學(xué)的機理。RAS是一個具有內(nèi)分泌特性的肽能的系統(tǒng)，AnglI作為RAS主要的效應(yīng)肽在肥胖癥及其相關(guān)疾病的控制中發(fā)揮重要作用，但作用效果的報道尚存在矛盾的，可見關(guān)于AngⅡ?qū)η爸炯?xì)胞分化的影響及其機制仍需要進(jìn)一步探索和研究。因此本文選用3T3-L1小鼠前脂肪細(xì)胞系為體外培養(yǎng)模型，采用血清法、血清饑餓法、油紅O染色法、分光光

2、度測定法及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)研究了AngⅡ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖及分化的影響及機制。 1．3T3-L1前脂肪細(xì)胞生長及分化的生物學(xué)特性 采用臺盼藍(lán)染色計數(shù)法、雞尾酒誘導(dǎo)法、油紅O染色法和分光光度測定法研究了細(xì)胞生長曲線、形態(tài)學(xué)特性、3T3-L1細(xì)胞分化過程中胞內(nèi)脂質(zhì)含量及GPDH活性。結(jié)果表明：3T3-L1細(xì)胞在第2 d進(jìn)入對數(shù)生長期，第4 d達(dá)到最高峰，第5 d進(jìn)入了平臺期；分化后第4 d

3、細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)戒環(huán)狀小脂滴，最后融合成單脂滴；3T3-L1細(xì)胞分化過程中，胞內(nèi)脂質(zhì)含量隨分化時間的增加而增加，且分化第6 d后增加迅速。GPDH活性隨分化時間的增加而增大，在分化第4 d后迅速增大，第8 d左右達(dá)到高峰并維持在較高水平。 2．AngⅡ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響 采用血清法和血清饑餓法兩種方法，研究了AngⅡ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol

4、/L、10μmol/L的AngⅡ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖無顯著性影響(P>0.05)，提示AngⅡ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖無顯著性影響。 3．AngⅡ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響 采用1μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L、1 nmol/L、0.1 nmol/L5個AngⅡ濃度梯度，研究了AngⅡ?qū)?T3-L1細(xì)胞分化后胞內(nèi)脂質(zhì)含量和GPDH活性的影響。結(jié)果表明100 nmol/L和1

5、0 nmol/L濃度的AngⅡ處理細(xì)胞8 d后，胞內(nèi)脂質(zhì)的總含量分別比對照組增長了62％和21％，GPDH活性在100 nmol/L濃度的AngⅡ處理8 d后顯著地增加，比對照組增長了64％，提示AngⅡ可促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞分化。 4．AngⅡ?qū)?T3-L1前脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1c mRNA表達(dá)的影響 運用RT-PCR技術(shù)研究了3T3-L1分化過程中AngⅡ?qū)ζ滢D(zhuǎn)錄因子PPARγC