組蛋白脫乙酰基酶抑制劑苯丁酸鈉誘導人類白血病細胞系細胞周期阻滯和分子機制的初步研究.pdf

1、第一部分：組蛋白脫乙?；敢种苿┍蕉∷徕c誘導人類白血病細胞系細胞周期阻滯的研究 組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑是一種廣譜的抗腫瘤藥物，它主要通過提高組蛋白的乙?；潭龋淖兡[瘤的基因表達譜達到抗腫瘤效果。HDAC抑制劑可以誘導包括U937在內的多種腫瘤細胞凋亡，阻滯細胞周期，誘導細胞分化。已有的研究顯示，HDAC抑制劑引起細胞周期阻滯主要是通過轉錄因子SP1上調p21WAF1/CIP1的表達實現(xiàn)的。 在課題的第一部分，

2、我們主要研究HDAC抑制劑對帶有AML1-ETO和PML-RARα的白血病細胞系Kasumi-1和NB4細胞周期的作用，及可能的分子機制。 研究表明，與其它的HDAC抑制劑相似，PB可以通過轉錄因子SP1上調p21WAF1/CIP1的表達，抑制白血病細胞系的細胞周期，并且這種作用具有時間和劑量依賴關系。 HDAC抑制劑同樣可以抑制Kasumi-1和NB4兩種白血病細胞的細胞周期，這種作用可能主要是通過上調p21WAF1/C

3、IP1的表達實現(xiàn)的，可能并不是通過逆轉AML1-ETO和PML-RARα的異常功能實現(xiàn)的。 第二部分：組蛋白脫乙酰基酶抑制劑苯丁酸鈉和AML1-ETO對p21WAF1/CIP1基因轉錄調控研究研究顯示，AML1-ETO一方面可以通過阻斷細胞分化，促進白血病的發(fā)生。另一方面，它也抑制細胞周期、抑制增殖，這不利于白血病的發(fā)生。AML1-ETO白血病發(fā)生過程中，需要獲得突變，克服這種增殖抑制。認識AML1-ETO抑制細胞周期的分子有助

4、于發(fā)現(xiàn)對該型白血病特異有效的治療方法。目前研究認為AML1-ETO抑制細胞周期主要是通過上調p21WAF1/CIP1和p27KIP，抑制周期素D3和CDK4，AML1-ETO在K562表達后，可以上調p21WAF1/CIP1的表達。 我們首先研究了AML1-ETO和AML1的不同剪接體對p21WAF1/CIP1啟動子轉錄活性的影響。研究發(fā)現(xiàn)，在CV-1細胞系，AML1-ETO和AML1b都抑制p21WAF1/CIP1的啟動子轉錄

5、活性，呈劑量依賴關系，AML1-ETO的轉錄抑制活性比AML1b明顯。結合以往的文獻，AML1-ETO與AML1b相似，對p21WAF1/CIP1的調控作用可能與細胞系的有關。AML1a對p21WAF1/CIP1啟動子轉錄活性可能也具有一定的轉錄抑制活性。使用含有部分p21WAF1/CIP1啟動子序列的報告質粒研究發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO和AML1的不同剪接體對p21WAF1/CIP1的轉錄抑制作用，主要是通過轉錄起始位點上游-211～-

6、2320bp的序列，對含有SP1結合位點的序列影響并不明顯，這與以往AML1b調控p21WAF1/CIP1的研究相一致。 在此基礎上，我們研究AML1-ETO和PB同時存在的條件下p21WAF1/CIP1轉錄的變化，研究發(fā)現(xiàn)AML1-ETO可以抑制PB對p21WAF1/CIP1啟動子活性的上調作用，而AML1b并不具有這種作用。AML1a只含有RUNT結構域，相當于AML1-ETO中的AML1部分，全長的ETO相當于AML1-E

7、TO中的ETO部分。AML1a和ETO并不具有這種抑制作用，因此，AML1-ETO的這種抑制作用要依賴于其融合蛋白的完整性。研究發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO抑制PB對p21WAF1/CIP1的上調，主要是通過p21WAF1/CIP1啟動子轉錄起始位點上游101bp的序列介導的，提示這主要是通過影響轉錄因子SP1實現(xiàn)的。為了證實這一點，我們選擇了SV40病毒基因啟動子，PB也可以通過SP1上調它的啟動子活性。研究發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO同樣可以抑

8、制PB對SV40基因啟動子活性的上調作用，這證實了這種抑制作用是通過影響SP1轉錄因子實現(xiàn)的。 業(yè)已證實，AML1-ETO對AML1b具有負顯性作用，過量的AML1b可能會逆轉AML1-ETO的轉錄抑制作用。為了證實這一點，我們研究了AML1b對AML1-ETO這種抑制的逆轉作用，研究發(fā)現(xiàn)AML1b和AML1a可以競爭性的逆轉AML1-ETO的抑制作用。Kasumi-1細胞經PB處理后，p21WAF1/CIP1的表達仍然上調，而沒