弓形蟲SAG1-ROP2-SAG2復(fù)合基因疫苗與免疫佐劑pmIL-12對小鼠的免疫保護(hù)性研究.pdf

1、弓形蟲是一種分布廣泛的、專性細(xì)胞內(nèi)寄生機(jī)會致病原蟲，可感染人及多種動物的有核細(xì)胞。弓形蟲感染人體后可侵犯多種臟器和組織并可通過母嬰垂直傳播而造成胎兒畸形、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎等引起流產(chǎn)、早產(chǎn)甚至死胎。對免疫功能低下者如艾滋病患者是致死主要病因。此外，弓形蟲病也給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，為了有效的防治弓形蟲，疫苗的研制已成為預(yù)防及治療弓形蟲病的發(fā)展方向。 在研究有關(guān)弓形蟲疫苗的過程中，發(fā)展多種抗原組合、針對

2、不同生活史發(fā)育階段的復(fù)合多價疫苗是研究弓形蟲疫苗過程中的一個發(fā)展方向與共識，這有助于克服單一抗原成分作為候選疫苗的不足。SAG1抗原作為弓形蟲速殖子期特異的主要表面抗原之一，具有高度的免疫原性和免疫保護(hù)性，是弓形蟲感染免疫診斷和疫苗開發(fā)的的主要候選抗原。ROP2蛋白是弓形蟲棒狀體分泌的一種蛋白，主要協(xié)助蟲體入侵宿主細(xì)胞，在弓形蟲生活史的速殖子期、緩殖子期和子孢子期中均有表達(dá)，具有高度的保守性和免疫原性。SAG2抗原為速殖子膜表面的另一重

3、要抗原，與弓形蟲入侵宿主細(xì)胞有密切的關(guān)系，到目前為止，對弓形蟲SAG2蛋白的功能研究較少，SAG2蛋白可以使弓形蟲固定于有核細(xì)胞的表面，并輔助弓形蟲進(jìn)入有核細(xì)胞，介導(dǎo)弓形蟲速殖子的入侵過程。 同時，為攻克核酸疫苗免疫效力低下的難題，我們選用小鼠白介素12(mIL-12)的真核表達(dá)質(zhì)粒作為基因佐劑，以增強(qiáng)弓形蟲復(fù)合抗原基因SAG1-ROP2-SAG2的免疫效果。在弓形蟲感染早期IL-12可強(qiáng)烈刺激NK細(xì)胞和T細(xì)胞分泌IFN-Y，繼

4、之激活巨噬細(xì)胞提高其殺傷弓形蟲活力，也能促進(jìn)CD4+T細(xì)胞向Thl細(xì)胞分化，并增強(qiáng)NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞殺傷功能。同時，IL-12對促進(jìn)IFN-Y的持續(xù)產(chǎn)生也起到重要作用。因此IL-12的表達(dá)在弓形蟲感染的急慢性期均起到重要作用。本研究選用弓形蟲復(fù)合抗原基因SAG1-ROP2-SAG2及基因佐劑mIL-12通過肌注方式免疫小鼠，觀察并研究其免疫保護(hù)性。結(jié)果表明復(fù)合基因疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于單基因疫苗SAG2及雙基因疫苗SAG1-ROP