弓形蟲(chóng)主要表面抗原SAG1和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白14-3-3的DNA疫苗免疫小鼠誘導(dǎo)的保護(hù)性研究.pdf

1、剛地弓形蟲(chóng)是一種機(jī)會(huì)性致病原蟲(chóng)，可引起人畜共患的弓形蟲(chóng)病。在一些國(guó)家，尤其是熱帶國(guó)家，弓形蟲(chóng)病(Toxoplasmosis)一直是重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題，給人類(lèi)健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。全球感染人數(shù)大約在10-20億，人感染弓形蟲(chóng)后通常表現(xiàn)為隱性感染，普通隱性感染也可引起強(qiáng)迫癥，精神分裂癥，抑郁癥，阿爾茨海默病，帕金森氏病等。弓形蟲(chóng)DNA疫苗可有效預(yù)防和控制弓形蟲(chóng)病的傳播，有利于人類(lèi)健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)研究表明，弓形蟲(chóng)14-3

2、-3蛋白具有免疫原性和抗原性，是一個(gè)有潛力的疫苗候選抗原。在本次研究中，我們?cè)u(píng)價(jià)了弓形蟲(chóng)SAG1和14-3-3的單基因和復(fù)合基因疫苗在小鼠體內(nèi)引起的免疫效應(yīng)。
　　目的:在本次研究中我們構(gòu)建了單基因和復(fù)合基因疫苗，分別接種BALB/c小鼠，觀察免疫效應(yīng)。研究的主要目的是評(píng)估弓形蟲(chóng)14-3-3蛋白作為疫苗候選抗原的可能性、驗(yàn)證弓形蟲(chóng)SAG1蛋白在小鼠體內(nèi)引起的免疫效應(yīng)以及評(píng)價(jià)單基因和復(fù)合基因疫苗的免疫效應(yīng)的差異。
　　方法:實(shí)

3、驗(yàn)過(guò)程中，BALB/c小鼠被隨機(jī)分成5組，包括三組實(shí)驗(yàn)組(pSAG1、p14-3-3和pSAG1/14-3-3)和兩組對(duì)照組(PBS和pBudCE4.1)。所有小鼠經(jīng)肌肉注射共免疫接種質(zhì)粒三次。小鼠血清抗體和細(xì)胞因子的水平使用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行測(cè)定。末次免疫后兩周，小鼠經(jīng)腹腔注射含弓形蟲(chóng)速殖子的懸液（1×104/只）。每天觀察并記錄小鼠的生存時(shí)間。
　　結(jié)果:與對(duì)照組相比，所有實(shí)驗(yàn)組小鼠（pSAG1，p14-3-3

4、和pSAG1/14-3-3）體內(nèi)產(chǎn)生的免疫反應(yīng)類(lèi)型主要以Th1型為主，產(chǎn)生較高水平的IgG2a和IFN-γ，并且隨著免疫次數(shù)的增加水平逐漸升高(P＜0.05)。在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中，IL-4和IL-10水平較低，且兩組之間沒(méi)有差異(P＞0.05)。在弓形蟲(chóng)感染攻擊實(shí)驗(yàn)中可以觀察到實(shí)驗(yàn)組小鼠的生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)，而對(duì)照組小鼠在7天內(nèi)全部死亡。在弓形蟲(chóng)速殖子攻擊感染后的第18天，所有小鼠均死亡，表明本次實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的DNA疫苗在小鼠體內(nèi)只能提供部分

5、保護(hù)，不能完全抵抗弓形蟲(chóng)急性感染。與單基因疫苗（pSAG1和p14-3-3）相比，復(fù)合基因疫苗(pSAG1/14-3-3)在小鼠體內(nèi)能產(chǎn)生更強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，小鼠的生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:弓形蟲(chóng)14-3-3蛋白在小鼠體內(nèi)能誘導(dǎo)有效的免疫反應(yīng)，是一個(gè)好的疫苗候選抗原。同時(shí)，研究證實(shí)弓形蟲(chóng)SAG1蛋白具有較好的免疫原性，是構(gòu)建復(fù)合基因疫苗的首選抗原。從我們的研究結(jié)果也可以看出復(fù)合基因疫苗能產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫