小類泛素修飾蛋白的表達(dá)純化和抗體制備.pdf

1、小類泛素修飾蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO)是近年發(fā)現(xiàn)的類泛素修飾蛋白,可通過(guò)異肽鍵共價(jià)連接到靶蛋白上,影響靶蛋白的生物學(xué)功能如細(xì)胞內(nèi)定位、穩(wěn)定性及與其它生物大分子的相互作用。在人中發(fā)現(xiàn)了四個(gè)SUMO亞型,分別是SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3、SUMO-4,其中SUMO-2/3的活性形式具有97％的同源性。為了研究人的SUMO化修飾對(duì)蛋白質(zhì)功能的影響,本文分別對(duì)人的SUMO-1、S

2、UMO-2和SUMO-4進(jìn)行了表達(dá)純化并制備其多克隆抗體,主要研究結(jié)果如下： 本實(shí)驗(yàn)用pET28a(+)作為載體構(gòu)建了人SUMO4的原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a-hSUMO4。利用本室保存的pET28a-hSUMO1、pET28a-hSUMO2和本文構(gòu)建的pET28a-hSUMO4分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),優(yōu)化了表達(dá)重組SUMO-1、SUMO-2、SUMO-4的誘導(dǎo)條件。SUMO-1和SUMO-2誘導(dǎo)條件相同：IPTG濃度

3、為0.1 mmol/L,于37℃誘導(dǎo)4 h。SUMO-4誘導(dǎo)IPTG濃度為0.5mmol/L,于37℃誘導(dǎo)8 h。在此基礎(chǔ)上,誘導(dǎo)表達(dá)了人重組SUMO-1,SUMO-2和SUMO-4蛋白,利用不同的純化方法得到高純度的變性和非變性的人重組SUMO-1,SUMO-2和SUMO-4蛋白。 以純化的變性和非變性人重組SUMO-1、SUMO-2和SUMO-4蛋白為抗原免疫新西蘭兔。利用ELISA法測(cè)定抗血清效價(jià),所制備的抗體在稀釋100