血管緊張素-(1-7)對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的:探討血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)表型轉(zhuǎn)化及細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響。
　　 方法:體外傳代培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞,按2x105/ml濃度接種于六孔板中,按以下分組加入不同干預(yù)因素,Ang-(1-7)和AngⅡ終濃度均為10-6mol/L。①對照組:細(xì)胞培養(yǎng)基中不加干預(yù)因素,②AngⅡ組:細(xì)胞培養(yǎng)基中加入AngⅡ,③Ang-(1-7)組:細(xì)胞培養(yǎng)基中

2、加入Ang-(1-7),@AngⅡ+Ang-(1-7)組:細(xì)胞培養(yǎng)基中同時加入AngⅡ和Ang-(1-7)。按上述分組培養(yǎng)24h,48h,72h,96h后,進(jìn)行如下檢測:(1)應(yīng)用細(xì)胞免疫化學(xué)染色法檢測細(xì)胞E-鈣粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)；(2)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測上清液中細(xì)胞外基質(zhì)成分Ⅰ型膠原(ColⅠ)和纖維粘連蛋白(FN)的含量；(3)收集細(xì)胞,抽提總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為c

3、DNA后采用實(shí)時熒光定量PCR(Real-timePCR)檢測細(xì)胞中E-cadherinmRNA,α-SMAmRNA,ColⅠmRNA和FNmRNA表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果:(1)細(xì)胞免疫化學(xué)檢測結(jié)果:①腎小管上皮細(xì)胞α-SMA表達(dá)的變化:培養(yǎng)24h,48h,72h,96h后,對照組幾無α-SMA陽性表達(dá)的細(xì)胞,Ang-(1-7)組與之類似；AngⅡ組細(xì)胞隨培養(yǎng)時間延長α-SMA表達(dá)也增加,但24h,48h,72h與同時間點(diǎn)

4、對照組比較,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；96h時AngⅡ組細(xì)胞α-SMA表達(dá)較對照組顯著增加(P<0.05),AngⅡ+Ang-(1-7)8H與同時間點(diǎn)AngⅡ組比較,細(xì)胞α-SMA表達(dá)明顯減少(P<0.05)；②腎小管上皮細(xì)胞E-cadherin表達(dá)的變化:培養(yǎng)24h,48h,72h,96h后,對照組細(xì)胞E-cadherin表達(dá)無減少,Ang-(1-7)組與之類似；AngⅡ組細(xì)胞隨培養(yǎng)時間延長其E-cadherin表達(dá)逐漸減少,但24h,48h,

5、72h時與同時間點(diǎn)對照組比較,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；96h時AngⅡ組細(xì)胞與對照組比較,E-cadherin表達(dá)顯著減少(P<0.05),AngⅡ+Ang-(1-7)組與AngⅡ組比較,細(xì)胞E-cadherin表達(dá)明顯增加(P<0.05)。(2)ELISA檢測結(jié)果:培養(yǎng)72h后,Ang-(1-7)組與對照組比較,細(xì)胞上清液中ColⅠ和FN的含量無明顯改變,AngⅡ組與對照組比較,細(xì)胞上清液中ColⅠ和FN的含量增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；培養(yǎng)96h

6、后,Ang-(1-7)組與對照組比較,細(xì)胞上清液中ColⅠ和FN的含量無明顯改變,AngⅡ組與對照組比較,細(xì)胞上清液中ColⅠ和FN明顯升高(P<0.05)；與AngⅡ組比較,AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中ColⅠ和FN含量明顯減少(P<0.05)。(3)Real-timePCR檢測結(jié)果:細(xì)胞培養(yǎng)96h后,與對照組比較,Ang-(1-7)組E-cadherinmRNA的表達(dá)無明顯改變,而AngⅡ組E-cadherinmRNA

7、的表達(dá)顯著減弱(P<0.05),與AngⅡ組比較,AngⅡ+Ang-(1-7)組E-cadherinmRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05):細(xì)胞培養(yǎng)96h后,與對照組比較,Ang-(1-7)組α-SMAmRNA、ColⅠmRNA和FNmRNA的表達(dá)無明顯改變,AngⅡ組α-SMAmRNA、ColⅠmRNA和FNmRNA表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05),與AngⅡ組比較,AngⅡ+Ang-(1-7)組α-SMAmRNA、ColⅠmRNA和FN