血管緊張素-(1-7)與血管緊張素II對(duì)巨噬細(xì)胞NPC1表達(dá)及膽固醇外流的影響.pdf

1、目的:
　　 以THP-1源性巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，研究血管緊張素-(1-7) [Ang-(1-7)]與血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對(duì)C型1類尼曼-匹克蛋白(NPC1)表達(dá)及膽固醇流出率的影響，闡明Ang-(1-7)對(duì)AngⅡ在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)方面的拮抗作用。
　　 方法:
　　 1、體外培養(yǎng)的人THP-1單核細(xì)胞經(jīng)佛波酯(PMA)誘導(dǎo)48小時(shí),使之分化為巨噬細(xì)胞
　　 2、實(shí)驗(yàn)分組：本實(shí)驗(yàn)分兩部分
　　

2、1)實(shí)驗(yàn)一AngII對(duì)THP-1源巨噬細(xì)胞NPC1表達(dá)及膽固醇流出率的影響
　　 ①空白對(duì)照組培養(yǎng)液中不加干擾因素；②AngII10nmol/L；③AngII100nmol/L；④AngII1000nmol/L；⑤AngII10000nmol/L。
　　 2)實(shí)驗(yàn)二Ang-(1-7)與AngII對(duì)THP-1源巨噬細(xì)胞NPC1表達(dá)及膽固醇流出率的影響
　　 ①對(duì)照組培養(yǎng)液不加干擾因素；②AngⅡ組：加入AngⅡ10

3、00nmol/L；③ Ang-(1-7)組：加入Ang-(1-7) 1000nmol/L；④ AngⅡ+Ang-(1-7)組:分別用Ang-(1-7)100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L 預(yù)處理30min后,再加入AngⅡ1000nmol/L；⑤AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779組：先用1000nmol/L A-779預(yù)處理30min后，再用終濃度為1000nmol/L Ang-(1-7)預(yù)處理30mi

4、n,最后加入終濃度1000nmol/L AngⅡ。
　　 3、運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western blotting分別檢測(cè)各組NPC1mRNA與NPC1蛋白表達(dá)的變化。
　　 4、[3H]膽固醇標(biāo)記巨噬細(xì)胞，經(jīng)過不同藥物干預(yù)后，應(yīng)用液體閃爍計(jì)數(shù)儀檢測(cè)膽固醇流出的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、正常細(xì)胞生長(zhǎng)良好， 單核細(xì)胞呈圓型、懸浮生長(zhǎng)， 誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化時(shí)加入佛波酯(PMA)160nmol

5、/L，誘導(dǎo)分化48h，細(xì)胞變?yōu)橘N壁生長(zhǎng)，形態(tài)不規(guī)則，伸出偽足。
　　 2、與對(duì)照組相比，血管緊張素Ⅱ能下調(diào)THP-1源性巨噬細(xì)胞C型1類尼曼-匹克蛋白mRNA與蛋白質(zhì)的表達(dá)，減少巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出（P＜0.05)，并呈濃度依賴性。
　　 3、與對(duì)照組相比，AngⅡ能引起THP-1源性巨噬細(xì)胞NPC1mRNA與蛋白質(zhì)表達(dá)的下調(diào)及膽固醇流出的減少（P＜0.05)；Ang-(1-7)使NPC1蛋白和mRNA表達(dá)升高，膽固醇流

6、出增多（P＜0.05)；混合刺激組中,不同濃度的Ang-(1-7) （100～10000nmol/L)呈劑量依賴性地增加AngⅡ抑制的THP-1源性巨噬細(xì)胞NPC1蛋白和mRNA的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞膽固醇流出，與AngⅡ組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0. 05)；加入A-779組與AngⅡ組比較無顯著差異(P＞
　　 0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、AngII可明顯抑制巨噬細(xì)胞C型1類尼曼-匹克蛋白的表達(dá)，減少巨

7、噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出并呈濃度依賴性。
　　 2、Ang-(1-7)可顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞C型1類尼曼-匹克蛋白的表達(dá)，增加巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，
　　 3、Ang-(1-7)可減輕AngII抑制巨噬細(xì)胞表達(dá)C型1類尼曼-匹克蛋白表達(dá)及膽固醇流出的作用，并呈濃度依賴性。
　　 4、Ang-(1-7)合用其特異性受體拮抗劑A-779，Ang-(1-7)所誘導(dǎo)的上述作用減弱，表明Ang-(1-7)的上述作用是通過其特異性受體