乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7-ADM的構(gòu)建及黃酮類化合物逆轉(zhuǎn)耐藥性的研究.pdf

1、乳腺癌是女性多發(fā)的惡性腫瘤之一，對(duì)女性的身心健康造成嚴(yán)重威脅。在乳腺癌的化療過(guò)程中很容易產(chǎn)生腫瘤多藥耐藥性(Multidrugresistance，MDR)MDR是化療成功的主要障礙，對(duì)腫瘤的治療極為不利。深入研究腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制，尋找關(guān)鍵的靶點(diǎn)，針對(duì)靶點(diǎn)設(shè)計(jì)逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的藥物，為乳腺癌患者的治療帶來(lái)希望。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者致力于對(duì)腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的開(kāi)發(fā)研究，大量研究證實(shí)許多黃酮類化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有一定抗腫瘤活性，能夠

2、抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、影響其細(xì)胞周期的分布或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，卻對(duì)正常細(xì)胞低毒或無(wú)毒，黃酮類化合物在逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性方面的研究引起高度關(guān)注。因此，本論文選擇10種結(jié)構(gòu)不同黃酮類化合物與阿霉素聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞，研究黃酮類化合物對(duì)阿霉素的增敏作用，在該基礎(chǔ)上構(gòu)建乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞系MCF-7/adm，用上述黃酮類化合物逆轉(zhuǎn)該耐藥細(xì)胞系的耐藥性。
　　主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)MTT法檢測(cè)10種黃酮類化合物與阿霉

3、素聯(lián)合作用，對(duì)阿霉素抑制MCF-7增殖的影響，而且通過(guò)hochest33342染色觀察黃酮類化合物與阿霉素聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞較阿霉素單獨(dú)作用時(shí)的細(xì)胞凋亡情況，并且通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明:3，5，7，4'-4OH黃酮、5，7-2OH黃酮、5-OH-3'-OCH3黃酮、7-OH-3'-OCH3黃酮、6-OH-3'-OCH3黃酮、5，7，4'-3OH黃酮、7-OH-2'-OCH3黃酮都促進(jìn)阿霉素對(duì)MCF-7增

4、殖的抑制作用，而5，7，3'，4'-4OH黃酮，Neodiosmin，Rutin則沒(méi)有該效果。Hochest染色以及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果與MTT結(jié)果一致，5，7，3'，4'-4OH黃酮，Rutin，Neodiosmin與阿霉素聯(lián)合作用較阿霉素單獨(dú)作用凋亡率低，另外7種黃酮類化合物與阿霉素聯(lián)合作用比阿霉素單獨(dú)作用凋亡率高。
　　2.采用大劑量間歇誘導(dǎo)法誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞，建立阿霉素耐藥的人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7/Adm，并通過(guò)MTT法檢測(cè)

5、耐藥模型較野生株的耐藥倍數(shù)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)藥物的積累量，以及real-timePCR檢測(cè)多藥耐藥的標(biāo)志基因ABCB1、ABCC1、ABCG2的表達(dá)變化。結(jié)果顯示:阿霉素耐藥的乳腺癌細(xì)胞系MCF-7/Adm誘導(dǎo)成功，阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/Adm細(xì)胞存活的IC50值分別為0.535μg/mL和173.275μg/mL，耐藥倍數(shù)為324。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中的阿霉素積累量明顯高于MCF-7/Adm;MCF-7/Ad

6、m細(xì)胞中mRNA水平ABCB1基因表達(dá)明顯上調(diào)，ABCG2和ABCC1基因表達(dá)下調(diào)。
　　3.通過(guò)MTT法檢測(cè)10種黃酮類化合物對(duì)MCF-7/Adm細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效果，結(jié)果顯示3，5，7，4'-4OH黃酮、5，7-2OH黃酮、7-OH-3'-OCH3黃酮、6-OH-3'-OCH3黃酮、5-OH-3'-OCH3黃酮、7-OH-2'-OCH3黃酮作用后，阿霉素對(duì)MCF-7/adm的IC50值都小于阿霉素單獨(dú)作用的值，說(shuō)明這6種黃酮化