蕨菜黃酮類化合物的提取與分析

1、蕨菜黃酮類化合物的提取與分析蕨菜黃酮類化合物的提取與分析摘要:用70%乙醇提取蕨菜黃酮類化合物得到粗黃酮經(jīng)聚酰胺純化得到精制黃酮。利用分光光度法測定了蕨菜粗黃酮、精制黃酮中的黃酮含量利用聚酰胺薄膜層析法及顏色反應并與標準品蘆丁、槲皮素的試驗做比較。結(jié)果表明:蕨菜干粉中總黃酮含量為7.28%粗黃酮、精制黃酮中黃酮含量分別為27.03%和41.25%。蕨菜黃酮類化合物主要是黃酮和黃酮醇兩類其中含有蘆丁成份。聚酰胺純化有一定效果但純化過程中約

2、70%黃酮損失。蕨菜別名拳頭菜、龍爪菜、如意菜等是藥食兩用植物經(jīng)常食用蕨菜會有一的保健作用。它是采自蕨科蕨屬中的蕨(Pteridiumaquilinumvar.latiusculum)的幼嫩葉。作為藥用蕨菜具有清熱滑腸降氣化痰利水安神降壓等功效[9]作為食用自古以來就被人們視為山珍野菜。如今更因其生長在山林野地少受污染并富含對人體有益的多種營養(yǎng)成分而倍受人們青睞。對蕨菜黃酮的提取、純化及含量測定進行了研究并進行了吸收光譜測定、聚酰胺薄膜

3、層析定性分析黃酮成分等若干分析為蕨菜的深度加工與保健功能研究提供依據(jù)。近年來人們對蕨菜的常規(guī)營養(yǎng)成分及其采摘加工甚至人工栽培等方面都有了不少的研究，但是有關(guān)蕨菜黃酮類物質(zhì)的研究卻鮮見報道。1材料與方法1.1材料采摘蕨菜長出地面15～20cm高的幼嫩葉(嫩葉拳卷期)為試驗材料。采摘地點:六安市郊區(qū)的丘陵林地。1.2儀器與試劑TU21201紫外可見光分光光度計WFH2203型三用紫外分析儀HH24數(shù)顯恒溫水浴鍋聚酰胺薄膜蘆丁槲皮素其余試劑均

4、為國產(chǎn)分析純。1.3蕨菜黃酮的提取與純化1.3.1蕨菜總黃酮的提取:新鮮蕨菜70℃烘至8成干然后剪成2～3mm碎段再103℃烘干后研成粉末狀。準確稱取一定質(zhì)量蕨菜干粉用索氏提取法(乙醚為抽提劑45℃水浴)脫脂及除脂溶性色素當乙醚抽提液無色時揮盡蕨菜粉1.5.6NaOH試驗:分別取粗黃酮液、精制黃酮液、蘆丁液約1ml于試管中加入幾滴1%NaOH溶液搖勻觀察現(xiàn)象。1.6黃酮含量測定采用分光光度法測定黃酮含量即利用黃酮類化合物與鋁鹽生成紅色絡

5、合物以蘆丁為標準品在510nm處測定吸光度。標準曲制作:準確稱取已于105℃條件下烘至恒重的蘆丁標準品10.0mg用70%乙醇定容至100ml。精確吸取蘆丁標準液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別置于6支試管中并將各管加水補足至5.0ml加入5%NaNO2溶液0.3ml搖勻放置6min后加10%Al(NO3)3溶液0.3ml搖勻放置6min再加4%NaOH溶液4ml加水0.4ml搖勻放置15min后于510nm處測吸

6、光度(以不加蘆丁的空白管為對照調(diào)零)。所得數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理可得到標準曲線的回歸方程。取一定體積樣品液按標準曲線相同方法操作測得吸光度后由回歸方程計算出黃酮含量。同時對蘆丁及蕨菜黃酮與鋁鹽生成的紅色絡合物在紫外及可見光區(qū)進行掃描得出黃酮2鋁鹽絡合物的吸收光譜。1.7蕨菜黃酮的聚酰胺薄膜層析定性分析用70%乙醇配制0.1%的精制黃酮液用70%乙醇分別配制0.01%的蘆丁及槲皮素液連同粗黃酮液共四種溶液分別點樣在聚酰胺薄膜上以甲醇∶冰乙酸∶水=

7、90∶5∶5為展開劑進行上行層析以1%AlCl3乙醇液為顯色劑顯色后分別在可見光及紫外光下觀察層析結(jié)果。2結(jié)果與討論2.1蕨菜黃酮提取物與蘆丁的吸收光譜蕨菜粗黃酮、蕨菜精制黃酮及蘆丁的70%乙醇液的紫外光范圍與可見光范圍的吸收光譜見圖1、圖2。由圖1知三種溶液在206nm附近皆有最大吸收峰。而蕨菜精制黃酮與蘆丁在260nm附近又有第二個吸收峰。但蘆丁在360nm處的吸收峰另外二者沒有。由圖2看出蕨菜粗黃酮及精制黃酮皆在660nm附近有一